阿須貝氏培養基分離好氧性自生固氮菌實驗
實驗方法原理
選擇性培養是一類根據某微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養，具有使混合菌中的劣勢發展成優勢菌的功能，故被廣泛用于菌種篩選等領域。阿須貝氏（Ashby）無氮培養基是一種缺之結合態無機或有機氮源的培養基，可有效從土壤中分離自生固氮菌。阿須貝氏（Ashby）無氮培養基選擇的原理是自生固氮菌在保證碳源（甘露醇或葡萄糖）和無機營養供應的情況下，可利用空氣中的游離氮合成自身需要的含氮有機物，而其他各類微生物多無自生固氮能力，因此達到了選擇性富集的效果。
實驗材料?阿須貝氏無氮培養基土
試劑、試劑盒?水甘露醇KH2PO4 NaCl CaSO4?2H2O CaCO3 蒸餾水瓊脂粉
儀器、耗材?培養皿吸管研缽接種環三角瓶載玻片
實驗步驟
一、 采集土樣
用小鏟鏟取稍干的10 cm深和20 cm深的土壤樣品約1克，適當研碎；
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二、 準備平板
將阿須貝氏培養基加熱融化，待冷至50 ℃左右倒數個平板，冷卻待用；
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三、紙板布土
將土樣倒在約15 cm×15 cm 大小的毛面硬紙板上，搖動幾下，輕輕倒去顆粒較大的土樣；
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四、彈土接種
把紙板沾土的面朝向平板并蓋上,隨即用手輕輕彈數下.然后移去紙蓋上皿蓋；
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五、保溫培養
將培養皿平板倒置后放入28 ℃恒溫中培養4-7 d；
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六、觀察菌落
凡出現大型、黏稠、半透明，顏色呈白色、褐色或黑褐色的菌落，一般都是好氧性固氮菌。
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七、分離純種
可用平板劃線分離法進行菌種純化。
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