1. ?接種一個單菌落于5 ml LB培養液，37℃溫和振搖培養5 h 或過夜。
2. ? 將2.5 ml 培養物加人到盛有500 ml LB培養液的2 L 燒瓶中，37℃搖勻振蕩培養至OD600為0.5~0.6。 ? 3. ?細菌在冰水浴冷卻10~15 min，然后轉移到預冷的1升離心瓶中。于2℃，5 000 g 離心20 min 沉淀用5 ml 預冷的水溶解6。
4. ?加入500 ml 冰冷的水，混勻，按步驟3重復離心1次，立即將上清倒掉，用殘余的液體重懸細胞。 ? 5. ?新鮮制得的細菌
（1）將懸浮液加入到預冷的50 ml 聚丙烯管中，2℃，5 000 g 離心10 min。
（2）估計細胞沉淀的體積，沉淀用等體積的冰冷水重懸。
（3）按50~300 ul 分裝于預冷的微量離心管中。
6. ?凍存細菌
（1）加入40 ml 冰冷的10%甘油，混合，然后按照步驟5離心。
（2）估計沉淀的體積，然后加入等體積的冰冷的10%甘油，重懸菌體。
（3）按50~300 ul 分裝于預冷的微量離心管中。
（4）于干冰上冷凍并貯存于-80℃。
7. ?將電轉化儀調到2.5 kV、 25 uF ，脈沖控制器調到200~400Ω;。
8. ?將1 ul 質粒DNA加入到盛有新鮮制備的細菌或融化的凍存細菌的小管中，混勻。 ? 9. ?將轉化混合物轉移到預冷的電轉化池中，吸干池的外表面，然后放入樣品槽中。
? 10. ?進行脈沖電轉化，然后取出電轉化池，馬上加入1 ml SOC培養液，并且用巴斯德吸管轉移到無菌的培養管中。
11. ?于37℃，中速振蕩培養30~60 min。
12. ?分小份涂布于含有抗生素的LB平板上。 | 
