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新冠病毒核酸檢測PCR技術知識點梳理（二）

2021.3.08

定量PCR，也就是qPCR,由于其英文全稱是real-time quantitative polymerase chain reaction，有些也稱為RT-qPCR，國外通常簡稱為qPCR,是由美國Applied Bisystems公司于1996年研制出的一種新型核酸定量技術，并隨著熒光PCR 儀的推出而逐漸得到廣泛應用。也是現在常用于臨床檢驗的PCR技術，該技術在常規PCR 基礎上運用熒光共振能量轉移現象( fluorescence resonance energy transfer, FRET) 技術, 加入熒光標記探針, 巧妙地把核酸擴增、雜交、光譜分析和實時檢測技術結合在一起, 在PCR 指數擴增期間通過連續監測熒光信號的強弱來即時測定特異性產物的量, 并據此推斷目的基因的初始量。

RT-PCR,實際上是反轉錄PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），又稱逆轉錄PCR。國際上的約定俗成的是：RT-PCR 特指反轉錄 PCR，而 Real-time PCR 一般縮寫為 qPCR（quantitative real-time PCR）

RT-PCR原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄稱cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因的表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。

RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用檢測細胞、組織中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特點基因的cDNA序列等。如果用于定量檢測，就是上文提到的qPCR，此次新冠病毒核酸檢測熒光PCR技術，就是基于此。

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新冠病毒核酸檢測試劑盒優勢：

? ? 特異識別和檢測新冠病毒SARS-CoV-2

? ? 適用于人痰液、鼻液、咽拭子樣本

? ? 可信度高、即用型、快速出結果 < 2 hr

新冠病毒核酸檢測試劑盒檢測原理圖示：

新冠病毒核酸檢測試劑盒組分：

新冠病毒全套核酸PCR檢測試劑盒（貨號#K1460-100）
中文名	英文名
2X qPCR主要預混物	2X qPCR Master Mix
反轉錄預混物	Reverse Transcription Mix
PCR引物和探針套裝	PCR Primer/ Probe set
緩沖液	Rehydration Buffer
新冠病毒陽性對照	COVID-19 Positive control (PTC)
陰性對照	Non-Template Negative Control (NTC)

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新冠病毒一步法PCR檢測試劑盒檢測原理：是基于一步法反轉錄實時定量PCR技術（real-time RT-PCR）,通過反轉錄病毒RNA實現快速高效的檢測新冠病毒(SARS-CoV-2)

新冠病毒一步法PCR檢測試劑盒（貨號#08-65-00250）組分：

組分	規格
50rxn	250rxn	5000rxn
40xOne-step SOLIScript? CoV ?Mix	25ul	125ul	2.5ml
5x One-step Probe CoV ?Mix	200ul	1ml	20ml
Nuclease-free water	1.25ml	5ml	100ml