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    EB病毒抗體血清學檢測是早期診斷鼻咽癌的首要選擇

    2021.5.15

    1967年Helen等在鼻咽癌病人的血清中發現EB病毒特異性的IgA抗體,鼻咽癌患者血清中經常存在高滴度的抗EB病毒多種抗原的特異性抗體譜。大量的研究證明,侵入人體鼻咽部上皮細胞的EB病毒是誘發鼻咽部細胞分裂、癌變的病理主因,在不同的感染階段表達出的蛋白抗原主要有潛伏期的膜抗原 (MA)家族和核抗原(NA)家族;裂解期的立即早期抗原(immediate early antigen),迄今被發現的有Rta和Zta;早期抗原(early antigen, EA);以及EB病毒復制重組過程所表達出的病毒衣殼抗原(virus capsid antigen)等等。這些抗原在EB病毒感染的不同階段激活人體淋巴免疫系統產生針對這些抗原的IgA、IgG、IgM抗體,分布于血液之中。

    使用抗原抗體免疫反應技術設計制作出EB病毒抗體檢測試劑盒,用來檢測血液中是否存在某種或某些EB病毒抗體及其滴度,來推測人體感染EB病毒的狀態和程度,對診斷EB病毒相關疾病的發生發展甚至預后具有十分重要的意義。

    檢測鼻咽癌相關抗體指標的血清學診斷方法目前已經成為鼻咽癌早期診斷的主要工具,該類方法只需取幾毫升靜脈血使用相應的試劑盒就可檢測,檢測結果由專門的儀器收集分析,具有創傷小、成本低、檢測速度快、結果報告客觀等優點,適用于鼻咽癌各個層次檢測的需求,可以進入常規健康體檢、高危人群篩查、門診臨床檢驗輔助診斷以及用于已確診鼻咽癌患者的治療效果監測。

    20世紀70年代初我國就開始研究EB病毒的血清學診斷方法,免疫熒光技術、免疫酶法涂片、酶聯免疫方法相繼建立。曾毅等在我國華南地區開展的大規模血清學調查,發現EBV-CA (Capsid Antigen,CA,衣殼抗原)和EA(Early Antigen, EA,早期抗原)的抗體反應,在鼻咽癌的臨床診斷和療效判斷上均有重要意義。然而免疫熒光和免疫酶法是以帶有EB病毒基因組的淋巴母細胞株B95-8細胞或Raji 細胞涂片檢查人血清中針對病毒衣殼抗原和早期抗原的IgA抗體的檢測方法。這兩種方法以固定細胞作為抗原的來源,在顯微鏡下逐一判斷結果,方法繁瑣,而且在EB病毒基因組的細胞中存在多種特異的或非特異的抗原成分,在結果的判定上,帶有一定的主觀性,影響了檢測方法的特異性和敏感性。而且,檢測這兩種抗體的方法是間接熒光免疫法,操作復雜,技術要求高,需要用熒光顯微鏡這樣昂貴的儀器,所以很難普及,因此研制一種更準確、敏感、快速、簡易的鼻咽癌診斷、篩查方法將是當今該類技術的發展趨勢。

    近年來,很多學者試探建立了ELISA檢測人血清中對EB病毒相關抗原的抗體,較細胞涂片方法簡單、敏感。

    自從1971年Engvall和Perlman首次報道建立酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)以來,由于ELISA具有快速、敏感、簡便、易于標準化等優點,使其得到迅速的發展和廣泛應用。ELISA方法的基本原理是酶分子與抗體或抗抗體分子共價結合,此種結合不會改變抗體的免疫學特性,也不影響酶的生物學活性。此種酶標記抗體可與吸附在固相載體上的抗原或抗體發生特異性結合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無色的還原型變成有色的氧化型,出現顏色反應。因此,可通過底物的顏色反應來判定有無相應的免疫反應,顏色反應的深淺與標本中相應抗體或抗原的量呈正比。此種顯色反應可通過ELISA檢測儀進行定量測定,這樣就將酶化學反應的敏感性和抗原抗體反應的特異性結合起來,使ELISA方法成為一種既特異又敏感的檢測方法。根據待測樣品與鍵結機制的不同,ELISA可設計出各種不同類型的檢測方式,主要以三明治法(sandwich)、間接法(indirect)、以及競爭法(Competitive)三種為主:三明治法常用于檢測大分子抗原,間接法常用于檢測抗體,競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機制,一般用于檢測小分子抗原。EB病毒基因表達的蛋白比較復雜,EB病毒感染人體細胞之后,依照不同的感染階段和感染狀態不同的基因組表達出不同的蛋白,其中具有較強抗原性的蛋白會刺激人體免疫系統產生相應的抗體。使用簡接ELISA技術檢測受檢者血液中EB病毒抗體,就能推測出EB病毒在人體內感染的狀況、階段甚至嚴重程度。

    衣殼抗原(CA)血清抗體、早期抗原(EA)血清抗體、核抗原1(NA-1) 血清抗體用于EB病毒感染的檢測已經多年了,在中國用于鼻咽癌的檢測也已有多年的歷史。

    EBV衣殼抗原(CA)是研究和應用得最廣泛的一種EBV抗原,目前應用最多的是EB病毒抗CA抗體。IgA/VCA單獨檢測雖然有較好的敏感性(76.3%),但其在健康人群里10%左右的檢出率提示特異性較差,對鼻咽癌診斷還存在明顯不足。

    近年應用于臨床檢測的EBV相關核抗原1(NA-l)是一種特殊的病毒蛋白,為潛伏期EBV DNA復制和細胞轉化所必需,它能夠在NPC組織活檢的上皮細胞中持續表達并在所有EBV相關腫瘤中都能表達,在潛伏期的檢出率最高。臨床試驗表明,NA-l作檢測抗原具有良好的特異性(87.93%),但靈敏度較低(56.8%),容易出現漏檢情況。

    EBV早期抗原(EA)由EA-D(彌散型EA)和EA-R(局限型)組成的復合物。在鼻咽癌患者血清中EA抗原類抗體主要于D型抗原發生特異性反應,檢測其IgA抗體具有較高特異性,但靈敏度較差。

    EBV裂解期立早基因編碼Rta蛋白是近十年來新發現的最受關注的新分子靶標,血液檢測Rta蛋白抗體在鼻咽癌篩查和早期診斷中有非常高的臨床診斷價值。


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