氨基酸的檢測方法
1、茚三酮反應(ninhydrin reaction)
試劑:茚三酮(弱酸環境加熱)
顏色:紫色(脯氨酸、羥脯氨酸為黃色)
原理:檢驗α-氨基酸
2、坂口反應?(Sakaguchi reaction)
試劑:α-萘酚+堿性次溴酸鈉
顏色:紅色
原理:檢驗胍基,精氨酸有此反應
3、米隆反應(又稱米倫氏反應)
試劑: HgNO3+HNO3+(加熱)
顏色:紅色
原理:檢驗酚基,酪氨酸有此反應,未加熱則為白色
4、Folin-Ciocalteau反應(酚試劑反應)
試劑:磷鎢酸-磷鉬酸
顏色:藍色
原理:檢驗酚基,酪氨酸有此反應
5、黃蛋白反應
試劑:濃硝酸(煮沸)
顏色:黃色
原理:檢驗苯環, 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反應
6、Hopkin-Cole反應(乙醛酸反應)
試劑:乙醛酸,濃硫酸
顏色:紫紅色
原理:檢驗吲哚基,色氨酸有此反應
7、Ehrlich反應
試劑:對二甲氨基苯甲醛、濃鹽酸
顏色:藍色
原理:檢驗吲哚基,色氨酸有此反應
8、硝普鹽試驗
試劑:Na2(NO)Fe(CN)2·2H2O、稀氨水
顏色:紅色
原理:檢驗巰基,半胱氨酸有此反應
9、Sulliwan反應
試劑:1,2-萘醌-4-磺酸鈉、Na2SO3
顏色:紅色
原理:檢驗巰基,半胱氨酸有此反應
10、Folin反應
試劑:1,2-萘醌-4-磺酸鈉(堿性環境)
顏色:深紅色
原理:檢驗α-氨基酸
肽鍵(peptide bond):一個氨基酸的羧基與另一個氨基酸的氨基縮合,除去一分子水形成的酰胺鍵。
肽(peptide):兩個或兩個以上氨基酸通過肽鍵共價連接形成的聚合物。是氨基酸通過肽鍵相連的化合物,蛋白質不完全水解的產物也是肽。肽按其組成的氨基酸數目為2個、3個和4個等不同而分別稱為二肽、三肽和四肽等,一般含10個以下氨基酸組成的稱寡肽(oligopeptide),由10個以上氨基酸組成的稱多肽(polypeptide),它們都簡稱為肽。肽鏈中的氨基酸已不是游離的氨基酸分子,因為其氨基和羧基在生成肽鍵中都被結合掉了,因此多肽和蛋白質分子中的氨基酸均稱為氨基酸殘基(amino acid residue)。
多肽有開鏈肽和環狀肽。在人體內主要是開鏈肽。開鏈肽具有一個游離的氨基末端和一個游離的羧基末端,分別保留有游離的α-氨基和α-羧基,故又稱為多肽鏈的N端(氨基端)和C端(羧基端),書寫時一般將N端寫在分子的左邊,并用(H)表示,并以此開始對多肽分子中的氨基酸殘基依次編號,而將肽鏈的C端寫在分子的右邊,并用(OH)來表示。已有約20萬種多肽和蛋白質分子中的肽段的氨基酸組成和排列順序被測定了出來,其中不少是與醫學關系密切的多肽,分別具有重要的生理功能或藥理作用。?
多肽在體內具有廣泛的分布與重要的生理功能。其中谷胱甘肽在紅細胞中含量豐富,具有保護細胞膜結構及使細胞內酶蛋白處于還原、活性狀態的功能。而在各種多肽中,谷胱甘肽的結構比較特殊,分子中谷氨酸是以其γ-羧基與半胱氨酸的α-氨基脫水縮合生成肽鍵的,且它在細胞中可進行可逆的氧化還原反應,因此有還原型與氧化型兩種谷胱甘肽。
一些具有強大生物活性的多肽分子不斷地被發現與鑒定,它們大多具有重要的生理功能或藥理作用,又如一些“腦肽”與機體的學習記憶、睡眠、食欲和行為都有密切關系,這增加了人們對多肽重要性的認識,多肽也已成為生物化學中引人矚目的研究領域之一。
多肽和蛋白質的區別,一方面是多肽中氨基酸殘基數較蛋白質少,一般少于50個,而蛋白質大多由100個以上氨基酸殘基組成,但它們之間在數量上也沒有嚴格的分界線,除分子量外,還認為多肽一般沒有嚴密并相對穩定的空間結構,即其空間結構比較易變具有可塑性,而蛋白質分子則具有相對嚴密、比較穩定的空間結構,這也是蛋白質發揮生理功能的基礎,因此一般將胰島素劃歸為蛋白質。但有些書上也還不嚴格地稱胰島素為多肽,因其分子量較小。但多肽和蛋白質都是氨基酸的多聚縮合物,而多肽也是蛋白質不完全水解的產物。
氨基酸以及各種氨基酸組成的二肽和三肽的吸收與單糖相似,是主動轉運,且都是同Na+轉運耦聯的。當肽進入腸粘膜上皮細胞后,立即被存在于細胞內的肽酶水解為氨基酸。因此,吸收入靜脈血中的幾乎全部是氨基酸。