磁珠法核酸提取的磁珠法核酸提取過程
取10-20mg左右的組織,用液氮研磨為粉末,轉入1.5mL 離心管內,加入100 μL 生理鹽水,振蕩15秒 (或直接在100 μL 生理鹽水中將組織勻漿為細胞懸液),加入200 μL 裂解液, 20 μL biog復合消化液,充分混勻,56℃溫育12分鐘(如組織勻漿不充分,可適當延長消化時間至組織完全消化)。
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冷卻到室溫,加入300μL異丙醇,充分混勻,再加入20μL磁珠復合液(每次使用前須充分混勻),振蕩混勻3min(注意不要顛倒混勻,以防磁珠粘附于管蓋內壁),靜置2min。
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將離心管置于磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附,開蓋,徹底吸棄上清液(注意槍頭不要接觸磁珠)。
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加入800μL配制后的洗滌液,將離心管從磁力架上取下,充分振蕩2min,確保磁珠完全分散。將離心管置于磁力架上放置約20s至磁珠完全吸附,開蓋,徹底吸棄上清液(注意槍頭不要接觸磁珠)。
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將離心管從磁力架上取下,開蓋,干燥約3-5min,至無明顯乙醇氣味。
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加入50-100 μL洗脫液,振蕩至磁珠充分散開,室溫靜置2min,再振蕩混勻1min。
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將離心管置于磁力架上,待磁珠完全吸附后,小心吸取上清液至一新的1.5mL離心管中,提取的核酸可直接用于下游實驗,或-20℃保存備用。
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