蛋白酶解的首選變性劑——RapiGest SF（一）

在生物藥肽圖分析、蛋白質修飾分析、蛋白質組學研究等諸多工作中，蛋白質的變性與酶解是樣品處理的必經之路。RapiGestTM SF正是在這個實驗步驟中，用以輔助蛋白酶解的變性試劑[^1,2,3]。RapiGest SF有以下優點：

■ 綜合水相、有機相溶液條件下，最高效的輔助酶解變性劑。

■ 作用過程中，不對蛋白造成副反應化學修飾。

■ 操作簡單、全面適應液質分析方法。

■ 常規操作濃度對胰蛋白酶活性無抑制。

■ 可大大縮短酶解反應時間。

■ 對各種蛋白酶、肽-N糖苷酶等多種酶解過程都適用。

在蛋白質質譜分析的大部分工作中，常常需要將蛋白質酶解為多肽進行分析。但蛋白質結構是以三維結構的形式存在的，為了將蛋白高級結構內部的酶切位點暴露于蛋白酶的作用下，首先需要對蛋白進行變性，使蛋白舒展開。John R. Yates教授領導的團隊對各種變性劑中的輔助酶切效果進行了充分比較，其中RapiGest SF的表現最為優秀（圖1）^[4]。仔細觀察圖1還可以發現，在實驗結果中，較為常用的尿素輔助酶切效率較差。這是由于尿素對胰蛋白酶活性的抑制作用較大。實驗人員有時會采取使用尿素進行蛋白后，將反映溶液稀釋10倍，再加入胰蛋白酶的方法，以降低尿素濃度到1M以下，減少其對胰蛋白酶的抑制。但是，面對微量的生物蛋白樣本，稀釋后的體系，會大幅度降低樣品濃度，限制了后續的分析工作。此外，尿素在對蛋白變性的過程中，還會對蛋白進行一定的化學修飾，如氨基甲酰化。副反應的發生對于多肽鑒定、組學水平蛋白定量會造成一定的影響與誤差。而使用RapiGest SF無副反應的問題，正常使用濃度下(0.1%)對胰蛋白酶活

性也無影響（表1）。

圖1. Tris水相緩沖體系下各種變性劑的輔助酶切效果比較。樣品為mammalian cell lysate cytoplasmic fraction蛋白。

檢測基于胰蛋白酶誘導N-α-苯甲酰-L-精氨酸乙基乙酯（BAEE）水解。將0.5微克胰蛋白酶加入1mL 50mM的碳酸氫銨溶液中（pH 7.9，0.2 mM BAEE）。檢測△BAEE在253 nm下的吸收值（5分鐘內的斜率）。