一、操作步驟
1. ?取潔凈小試管14只分兩排排列于試管架上，每排7只依次用蠟筆注明號碼，于每管中分別加入0.5毫升生理鹽水。
2. ?在第1排1管中加入1：10稀釋傷寒H血清0.5毫升，于管內連續吹吸3次，使血清與鹽水充分混合，而后吸出0.5毫升注入第2管，同樣予以混勻后吸出0.5毫升注入第3管。依次類推，稀釋到第6管，自第6管吸出0.5毫升棄去。此時，自第1管至第6管的血清稀釋倍數為1：20，1：40，1：80，1：160，1：320，1：640。第7管不加血清作為對照。
3. ?同法用吸管吸取1：10稀釋傷寒桿菌O血清加入第2排第1管，并依次如上法予以稀釋。
4. ?用移液管吸取傷寒桿菌H菌液，加收第1排各管中每管0.5毫升（由鹽水對照管開始，依次由后向前加入）此時血清稀釋倍數又增加了一倍。
5. ?同法于第2排各管中加入傷寒O菌液0.5毫升。
6. ?將各管振蕩混勻，放37℃水浴箱中2~4小時或37℃孵育箱中過夜次日取出觀察結果。
二、觀察結果
1. ?觀察切勿搖動試管，以免凝集塊分散。
2. ?先看對照管，此管應無凝集現象，管內液體仍成混濁狀態。但如放置時間較長，細菌堆于管底成小圓點狀，為陰性反應。
3. ?試驗管應自第1管看起，如有凝集時則于管底有不同大小的圓片狀邊緣不整齊的凝集物，上清則澄清透明或不同程度混濁。凝集的強弱可用“+”號表示如下：
“++++”凝集很強，管內液體完全澄清，凝集塊完全沉于管底。
“+++”凝集強，管內液體不完全澄清稍有輕度混濁，凝集塊沉于管底。
“++”凝集中等強度，液體半澄清，凝集塊沉于管底。
“+”凝集弱，管內液體混濁，少量凝集塊沉于管底。
“－”不凝集，管內液體和對照管同樣混濁，無凝集塊。
4. ?輕輕振蕩各管，觀察凝集塊的狀態，對照管的細菌在振蕩時呈煙霧狀上升，隨即消散，細菌分散仍呈混濁狀態。“H”菌液的凝集塊疏松呈棉狀，大片沉于管底輕搖即升起，并極易破碎。“O”菌液凝集呈緊密顆粒狀，沉于管底堅實致密，輕輕振搖不易升起，凝集顆粒較小不易搖碎。
5. ?記錄觀察的結果并制定凝集效價。通常以能產生明顯凝集（++）的血清大稀釋倍數作為該血清的凝集效價。如血清的最低稀釋度（即第1管1：40）仍無凝集應報告為低于1：40。如血清的最高稀釋度（即第6管1：1280）仍顯完全凝集現象。，應報該血清效價高于1：1280。
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