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    血清總膽固醇的測定

    2020.9.07

    實驗原理
    血清膽固醇(chol)測定是動脈粥樣硬化性疾病防治、臨床診斷和營養研究的重要指標。正常人血清膽固醇含量范圍 100 ~ 250mg/mL。膽固醇是環戊烷多氫菲的衍生物,它不僅參與血漿蛋白的組成,而且也是細胞的必要結構成分,還可以轉化成膽汁酸鹽、腎上腺皮質激素和維生素D等。膽固醇在體內以游離膽固醇及膽固醇酯兩種形式存在,統稱總膽固醇。總膽固醇的測定有化學比色法和酶學方法兩類。本實驗采用前一方法。膽固醇及其酯在硫酸作用下與鄰苯二甲醛產生紫紅色物質,此物質在550nm波長處有最大吸收。因此,可用比色法作總膽固醇的定量測定。膽固醇含量在 400mg/100mL以內時,與光吸收值呈良好線性關系。本法不必離心,顏色產物也比較穩定。
    試劑和器材
    一、試劑
    鄰苯二甲醛試劑:稱取鄰苯二甲醛50mg,以無水乙醇溶至50mL冷藏,有效期為一個半月。
    混合酸:冰乙酸100mL與濃硫酸100mL混合。
    標準膽固醇貯存液(1mg/mL):準確稱取膽固醇100mg,溶于冰乙酸中,定溶至100mL。
    標準膽固醇工作液(0.1mg/mL):將上述貯存液以冰乙酸稀釋10倍,即取10mL用冰
    乙酸稀釋至100mL。
    二、測試樣品
    0.1mL人血清以冰乙酸稀釋至4.00mL。
    三、器材
    試管1.5×15cm(×12);移液管0.5mL(×5),10mL(×1),0.1mL(×1);分光光度計。

    操作方法

    一、制作標準曲線

    取9支試管編號后,按下表順序加入試劑:

    管號

    0

    1

    2

    3

    4

    5

    6

    7

    8

    標準膽固醇工作液(mL)

    0

    0.05

    0.10

    0.15

    0.20

    0.25

    0.30

    0.35

    0.40

    冰乙酸(mL)

    0.40

    0.35

    0.30

    0.25

    0.20

    0.15

    0.10

    0.05

    0

    鄰苯二甲醛試劑(mL)

    0.20

    0.20

    0.20

    0.20

    0.20

    0.20

    0.20

    0.20

    0.20

    混合酸(mL)

    4.00

    4.00

    4.00

    4.00

    4.00

    4.00

    4.00

    4.00

    4.00

    相當于未知血清中

    總膽固醇量(mg%)

    0

    50

    100

    150

    200

    250

    300

    350

    400

    A550










    加畢,溫和混勻,20~37℃下靜置10分鐘,在540nm波長處測定光吸收值。以總膽固醇量(mg%)為橫坐標,光吸收值為縱坐標做出標準曲線。

    二、樣品測定

    取3支試管編號后,分別加入試劑,與標準曲線同時作比色測定:

    管號

    對照

    樣品 ①

    樣品 ②

    稀釋的未知血清樣品(mL)

    0

    0.40

    0.40

    鄰苯二甲醛試劑(mL)

    0.20

    0.20

    0.20

    冰乙酸(mL)

    0.40

    0

    0

    混合酸(mL)

    4.00

    4.00

    4.00

    A550




    加畢,溫和混勻,20~37℃下靜置10分鐘,在550nm下測定光吸收值。然后,從標準曲線上可查出樣品中總膽固醇的含量。

    注意事項

    本法在20~37℃條件下顯色。


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