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血清總膽固醇的測定

2020.9.07

實驗原理
血清膽固醇(chol)測定是動脈粥樣硬化性疾病防治、臨床診斷和營養研究的重要指標。正常人血清膽固醇含量范圍 100 ~ 250mg/mL。膽固醇是環戊烷多氫菲的衍生物，它不僅參與血漿蛋白的組成，而且也是細胞的必要結構成分，還可以轉化成膽汁酸鹽、腎上腺皮質激素和維生素D等。膽固醇在體內以游離膽固醇及膽固醇酯兩種形式存在，統稱總膽固醇。總膽固醇的測定有化學比色法和酶學方法兩類。本實驗采用前一方法。膽固醇及其酯在硫酸作用下與鄰苯二甲醛產生紫紅色物質，此物質在550nm波長處有最大吸收。因此，可用比色法作總膽固醇的定量測定。膽固醇含量在 400mg/100mL以內時，與光吸收值呈良好線性關系。本法不必離心，顏色產物也比較穩定。
試劑和器材
一、試劑
鄰苯二甲醛試劑：稱取鄰苯二甲醛50mg，以無水乙醇溶至50mL冷藏，有效期為一個半月。
混合酸：冰乙酸100mL與濃硫酸100mL混合。
標準膽固醇貯存液（1mg/mL）：準確稱取膽固醇100mg，溶于冰乙酸中，定溶至100mL。
標準膽固醇工作液（0.1mg/mL）：將上述貯存液以冰乙酸稀釋10倍，即取10mL用冰
乙酸稀釋至100mL。
二、測試樣品
0.1mL人血清以冰乙酸稀釋至4.00mL。
三、器材
試管1.5×15cm（×12）；移液管0.5mL（×5），10mL（×1），0.1mL（×1）；分光光度計。

操作方法

一、制作標準曲線

取9支試管編號后，按下表順序加入試劑：

管號	0	1	2	3	4	5	6	7	8
標準膽固醇工作液(mL)	0	0.05	0.10	0.15	0.20	0.25	0.30	0.35	0.40
冰乙酸(mL)	0.40	0.35	0.30	0.25	0.20	0.15	0.10	0.05	0
鄰苯二甲醛試劑(mL)	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20	0.20
混合酸(mL)	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00	4.00
相當于未知血清中總膽固醇量(mg%)	0	50	100	150	200	250	300	350	400
A550

加畢，溫和混勻，20～37℃下靜置10分鐘，在540nm波長處測定光吸收值。以總膽固醇量（mg%）為橫坐標，光吸收值為縱坐標做出標準曲線。

二、樣品測定

取3支試管編號后，分別加入試劑，與標準曲線同時作比色測定：

管號	對照	樣品 ①	樣品 ②
稀釋的未知血清樣品(mL)	0	0.40	0.40
鄰苯二甲醛試劑(mL)	0.20	0.20	0.20
冰乙酸(mL)	0.40	0	0
混合酸(mL)	4.00	4.00	4.00
A550