用流式法（FACS)分離間質SP細胞實驗
實驗方法原理
實驗材料 2?4代的間質細胞
試劑、試劑盒 HBSS 2FBHoechst33342染料 lmg ml水溶碘化丙啶（PI) 2mg ml水溶維拉帕米 500μg ml水溶DMEM 2FB胰蛋白酶 TrypLE:TrypLEExpress或0.25%胰蛋白酶 溶于CMF-SalineG
儀器、耗材 MoFlo(或與其類似的）高速細胞分選儀具備350 nm激發能力
實驗步驟
(a)胰蛋白酶消化2?4代的間質細胞。
(b)細胞計數，用DMEM/2FB將細胞稀釋至1×106個細胞/ml。
(c）加入5μg/mL (Hoechst33342染料，37℃，90 min，每20 min攪動一次。
(d)對照組細胞在加人Hoechst33342染料前，先加入50μg /ml維拉帕米孵育20min。
(e)染色后，在4℃環境下用HBSS/2FB將細胞洗兩遍并離心，之后在冰上用冷HBSS/2FB重懸細胞。
(f)于分選前加入2μg/ml PI以鑒別無活性的細胞。
(g)無菌條件下分選細胞，高速細胞分選儀，用350nm激發。收集藍色（670 nm)和紅色（450 nm)熒光均減弱的細胞。邊群細胞通過上述步驟與死細胞和完全被染料標記的細胞分離開并被收集起來。對照組要確保用維拉帕米先行孵育后使邊群細胞消失。
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