人軟骨細胞的分化
試劑和材料：
1.分化培養基：DMEM/F12（1：1）、1%ITS（胰島素、轉鐵蛋白、硒；V/V）、TGF-eta;1 1ng/ml、HEPES 10mmol/L；
2.胰蛋白酶/EDTA：胰蛋白酶（0.05%）和EDTA（0.53mmol/L）A配制；
3.A：無Ca2+，Mg2+的Dulbeccorime磷酸鹽緩沖液；
4.離心管，15ml；
5.普通器皿，30ml，或圓錐底的離心管（50ml）；
實驗方法：
1.從培養瓶中吸出生長培養基棄之；
2.A潤洗后棄之洗液；
3.加入足量的胰蛋白酶/EDTA覆蓋培養瓶底；
4.在37℃孵育5—10min（在顯微鏡下觀察細胞是否脫落）；
5.重懸細胞，置于15ml離心管中，300g離心5min；
6.用1ml生長培養基洗滌，轉移至普通器皿或離心管中；
7.用血細胞計數板對細胞進行計數；
8.重復離心（620g，10min），棄去上清液；
9.用分化培養基將其稀釋到1&time106個細胞/ml；
10.按1ml/管分裝到新Eendorf管中；
11.300g離心5min，上清保留不動；
12.置于37℃孵箱；
13.每2—3天更換培養基；
14.培養2—3周軟骨生成。
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