病毒的雞胚培養_尿囊腔接種

雞胚

消毒劑 (2. 5% 碘酒和 75% 酒精）

檢卵燈照明燈卵杯卵盤雞胚開孔器等

1. 接種步驟與方法

(1) 取 9~11 日齡的雞胚，在檢卵燈上照視后，用鉛筆劃出氣室與胚胎位置，并在胚胎面與氣室交界之邊緣上約 1 mm 處避開血管作一標記，此即為注射點。

(2) 將雞胚豎放在卵杯上，鈍端向上。用 2.5%碘酒及 75%酒精分別消毒氣室部的蛋殼，并用開孔器鉆開一長約 2 mm 小口，此操作勿損傷殼膜。

(3) 再次用 2. 5%碘酒消毒鉆孔區，以擦去蛋殼碎粒，并用1 ml 注射器吸取待接種的病毒液 0. 1~0. 2 ml, 將針頭刺入孔內，經尿囊膜入尿囊腔，注入病毒液。

(4) 用 2. 5%碘酒消毒后，再用石蠟溶化封孔，于 33-35℃孵卵器孵育 48~72 h(培育時間應根據病毒種類及收獲的材料何時使用而定），每日照檢，于接種后 24 h 內死亡者為非特異性死胚應棄去。

2. 解剖與收獲 接種后收獲病毒的時間根據不同病毒而異，甲型流感病毒一般培養 44~48 h,乙型流感病毒培養 72 h 。

(1) 收獲前雞胚須置 4℃冰箱 6 h 或過夜，但不能放置時間過長。

(2) 用 2. 5%碘酒和 75%酒精消毒氣室處的卵殼，并用滅菌剪刀剪去氣室部的卵殼，此時勿使其碎片落于未損傷的殼膜上。用無菌鑷子撕去氣室部殼膜，并翻開到卵殼邊上。

(3) 將雞卵傾向胚胎一側，用滅菌毛細吸管通過絨毛尿囊膜進入尿囊腔，吸出尿囊液。一般一個雞胚可收獲 5~10 ml 的尿囊液。若操作時損傷了血管，則病毒會吸附在紅細胞上，尿囊液則無用。收獲的尿囊液經無菌試驗后，可在 4℃或低溫保存待用。