實驗室分析儀器--紫外分光光度法測定食品中咖啡因
目前，測定咖啡因的方法有電化學法、光譜法、氣相色譜法、液相色譜法等。而用紫外-分光光度法進行咖啡因測定，只需加入幾種試劑來消除干擾，它與美國分析化學家協會（Association of Official Analytical Chemists，AOAC）的分析方法比較，操作更簡便、快速、準確。
該方法的測定原理為：可可類食品中除咖啡因外，還含有可可堿等成分，茶葉中還含有酚類、沒食子酸和葉綠素等成分，這些成分均可溶于水，當用二氯甲烷作萃取劑時只有咖啡因被萃取，經多次萃取后在277nm 處測定吸光度，即可求咖啡因的含量。利用咖啡因與其他物質在有機溶劑中的溶解性能不同加以分離提取，然后根據咖啡因對紫外光有強烈吸收，在一定含量范圍內與吸光度成正比。
樣品處理：取適量樣品（含 CO2?的樣品應預先加熱趕氣，固體不溶性樣品應加水置沸水浴1h，并不斷攪拌），磨碎于三角瓶中，加沸水75mL 在沸水浴中加熱45min，趁熱過濾于容量瓶中，洗滌2～3次，冷卻后定容，吸取溶液10mL 于50mL 容量瓶中，加5mL 0.01mol/L 的鹽酸溶液和1mL堿性乙酸鉛溶液去除茶葉中重金屬離子，用蒸餾水定容。移取上述溶液30mL 于50mL 分液漏斗中，每次用5.0mL 二氯甲烷萃取（共7次），合并萃取液定容至刻度。
測定：從二氯甲烷為溶劑的咖啡因儲備液（c=500μg/mL）中分別移取0.00mL、0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL、3.00mL、3.50mL 于50mL 容量瓶中，用二氯甲烷定容得系列標準液，在277nm處測定吸光度，同時將上述已處理好的樣液在277nm 處測定吸光度，從工作曲線上即可求得茶葉中咖啡因的含量。
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