SDS法分離植物DNA
實驗概要
Dellaporta，Wood?和?Hicks (1983)?法分離植物總基因組DNA，通過實驗掌握SDS法從植物葉片提取DNA?的原理和方法。
主要試劑
提取緩沖液?[?詳細信息：100mM Tris.Cl,；50mM EDTA； 500mM Nacl；40mmol/L?巰基乙醇，隨用隨加。]
液氮
異丙醇
TE緩沖液
無水乙醇
70%乙醇
KAC ?[?詳細信息： 5mol/L KAC。]
主要設備
移液器
冷凍高速離心機
臺式高速離心機
水浴鍋
陶瓷研缽
離心管?[?詳細信息：離心管，50ml，有蓋。]
離心管?[?詳細信息：離心管，5ml?和?1.5ml規格。]
小玻棒 [?詳細信息：小玻棒，彎成鉤狀的。]
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實驗步驟
1.??將2g經去淀粉處理的新鮮植物組織置于液氮中速凍,用研缽磨成細粉.
2.??將冷凍粉末轉移至一50mL?離心管中并加入15mL提取緩沖液。輕輕旋轉混勻。
3.??加入1mL 20% SDS，混勻，65°C保溫10min?并不時輕輕旋轉混勻（要點1）。
4.??加入5mL 5mol/L KAC，混勻后冰上放置20-30min（要點2）。
5.??25000g，4°C離心20min。
6.??上清用雙層Miracloth紗布過濾，轉移至一干凈的50mL離心管中，加入10mL異丙醇，輕輕顛倒混勻，-20°C放置40min沉淀核酸。
7.??2000 g，4°C 離心20min，去上清，晾干沉淀5min。
8.??用700uL 50TE?緩沖液溶解沉淀并轉移至一?Eppendorf?管中（要點3）。
9.??加入7uL RNase A?貯液，37°C保溫1h。
10.??加入75 uL 3mol/L KAc，輕彈混勻，離心15 min沉淀不溶性雜質。
11.??將上清轉移至一裝有500uL?異丙醇的干凈管中，輕輕混勻，室溫下放置5min。
12.??微量離心機離心15min沉淀DNA，去上清并用500uL 70%乙醇清洗沉淀。再次離心5min，用巴斯德玻璃吸管吸去乙醇。
13.??沉淀物溶解于200uL TE?緩沖液中，4°C保存。
注意事項
1.??將SDS溶液加入到化凍的提取物中時，可能會有沉淀析出，要保證析出的SDS重新溶解，以及?65°C保溫時提取物混合均勻。?
2.??在高濃度（>1 mol/L)的鉀離子存在的情況下，十二烷基磺酸鈉(SDS)會與蛋白或多糖結合變成不溶性的十二烷基磺酸鉀復合物，這類復合物通常呈絮狀，必須要經較高轉速離心和Miracloth紗布過濾予以去除。
3.??若沉淀難于重新溶解，可在65°C加熱10min。
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技術原理
