細胞傷口愈合實驗
實驗試劑
DMEM培養基
胎牛血清
PBS
BD24孔細胞培養板
Raininpipettips,1ml
戊二醛
乙醇
結晶紫
實驗設備
細胞培養儀：37°Cand5%CO2
實驗材料
人MDA-MB-231cell
實驗步驟
1.?細胞在含有10%FBS的DMEM培養基中生長。
2.?細胞以一定密度接種到24孔細胞培養板中，生長24小時后，單層細胞融合度應達到70-80%。
3.?不要更換培養基。用新的1ml槍頭輕輕的在單層培養細胞間劃痕，劃痕橫穿過孔，槍頭盡量與板孔的底部垂直，不要傾斜。這樣產生的gap的距離才與槍頭末端的外直徑相等。Gap的距離可以選用不同型號的槍頭調節。劃痕在同一方向成一條直線。
4.?在垂直與*條劃痕的方向制作另一條劃痕，每孔劃痕成十字交叉型。
5.?劃痕后，用培養基輕輕的清洗板孔2次，以去除脫落細胞。
6.?每孔添加新鮮培養基。
7.?(培養基中含有某些成分，如抑制/促進細胞遷移和/或增殖的化學物質)。
8.?細胞生長48小時(或根據時間需要)。
9.?1xPBS清洗細胞兩次，然后使用3.7%多聚甲醛固定30分鐘。
10. 0.1%的結晶紫(2%乙醇溶解)染色30分鐘。
11. 染色的單層細胞選取不同的視野，顯微鏡拍照。gap的距離可通過Photoshop或ImagJ軟件測量.為了降低實驗結果的可變性，建議每孔選擇多個視野觀察，每組做多個重復。
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項目成果
