Maurice-nrCE-SDS方法在測試26種FDA批準的單抗和2種ADC的應用-3

Maurice-nrCE-SDS測試鉸鏈穩定型的IgG4亞類

Maurice-nrCE-SDS方法測試了包括兩種野生型HzIgG4k（natalizumab和reslizumab）和三種鉸鏈穩定的hzIgG4k（ixekizumab和pembrolizumab）和huIgG4k（nivolumab）生物制藥產品。結果顯示H2L2種類的數量在93.7％至96.3％之間變化。與其他IgG亞類相似，在這五種產品中發現的主要片段是H2L，質量約為125kDa（相對量在1.6％至3.9％之間），其它碎片含量極低（僅在0.1％和0.5％之間）。與其它治療性mAb相比，主要差異與％HL有關。其中野生型IgG4分別為natalizumab和reslizumab的HL%異常高，分別等于2.2％和3.9％。其原因在于野生型的IgG4：(I)鉸鏈區相關的靈活性，(Ii)鉸鏈區中兩個重鏈之間相對不穩定的二硫鍵，(Iii)兩個重鏈的兩個CH3結構域之間的非共價相互作用，從而促進了兩個IgG4s之間的h-l對交換。盡管如此，Maurice-nrCE-SDS方法仍然輕松評估IgG4亞類產品中分子量變異體的數量，并且只需對電泳圖進行目視檢查即可快速評估野生型和鉸鏈穩定IgG4之間的差異。

Maurice-nrCE-SDS測試ADC藥物

Maurice-nrCE-SDS方法檢測了兩種第二代ADC的適用性，即鉸鏈半胱氨酸共軛Brentuximab vedotin和賴氨酸共軛Trastuzumab emtansine。ADC藥物的特征是具有一定的藥物負荷分布(DLD)、藥物與抗體比(DAR)和僅由鏈間靜電相互作用維持的H2L2結構。結果顯示ADC藥物brentuximab vedotin中的8.1％的H2L2與通過HIC或native-MS評估的裸抗體量一致。L（+1接頭有效載荷，PL），H（+3LP），HL（+2LP），H2（+2LP），H2L（+1LP）和H2L2可以通過基線分辨率分離。NrCE-SDS雖然不是分析半胱氨酸連接的ADC DLD和DAR的首選方法，但可以用作鑒定方法和批次的一致性。Trastuzumab emtansine是一種賴氨酸偶聯的ADC，在賴氨酸共軛的情況下，這些ADC的H2L2結構通過鏈間二硫鍵得以維持。因此，nrCE-SDS可以確定和分離單體和碎片，如圖所示，所有的L，H，HL，H2，H2L和H2L2均已很好地分開，且H2L2天然單體形式約占96％，與trastuzumab母體裸抗一致。

Maurice-nrCE-SDS應用于藥物生產工藝

Maurice-nrCE-SDS方法檢測了在兩種不同培養條件下，在CHO細胞中產生的兩個不同批次的相同抗體（HzIgG1k）的nrCE-SDS結果以及質譜鑒定結果。揭示了在大規模單克隆抗體生產過程中，需要優化上游和下游的生產工藝才能解決由于二硫鍵的部分還原而引起的抗體片段化。而nrCE-SDS與質譜聯用是需要在整個藥品開發階段使用。

附表（Maurice-nrCE-SDS方法測試26種單克隆抗體（mAbs）和2種抗體藥物偶聯物（ADCs）結果）

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結論：

本研究利用Maurice-nrCE-SDS方法建立了一種通用的nrCE-SDS方法，用于確定具有不同亞型和輕鏈特異性的多種治療性抗體的分子量變異體（H2L2和LMW）的適用性。就相對遷移時間和片段與完整mAb的相對百分比而言，Maurice-nrCE-SDS方法重復性極佳。且該方法已成功應用于IgG1，IgG2和IgG4亞類和ADC藥物。因此此方法可用于QA/QC環境下生物制藥產品的放行、穩定性、批次一致性和保質期評價。