人基質金屬蛋白酶-7(MMP-7)ELISA試劑盒
人基質金屬蛋白酶-7(MMP-7)ELISA試劑盒
?(用于血清、血漿、細胞培養上清液和尿液、唾液生物體液內)
原理
本實驗采用雙抗體夾心?ABC-ELISA法。用抗人?MMP-7?單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的?MMP-7與單抗結合，加入生物素化的抗人MMP-7，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結合，加入底物工作液顯藍色，最后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，MMP-7濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中MMP-7濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated?Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme?Conjugate） | 12ml |
10×標本稀釋液（Sample?Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash?Buffer） | 50ml |
標準品（Standards）：2ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB?Solution） | 12ml |
第一抗體工作液（Biotinylated?Antibody） | 12ml | 終止液（Stop?Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1.?收集標本：血清、血漿（肝素抗凝）、細胞培養上清液、尿液、唾液等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20?℃或-70?℃）保存，避免反復凍融。血清或血漿測定前用標本稀釋液至少作1：50稀釋（取20ul，加標本稀釋液980ul,稀釋50倍）。
2.?標準品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液。設標準管8管，每管加入標本稀釋液200ul。在第一管中加入4000pg/ml的標準品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對照。
3.?10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4.?洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1.?加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘。
2.?洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
3.?每孔中加入第一抗體工作液100ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4.?洗板：同前。
5.?每孔加酶標抗體工作液100ul。將反應板置37℃30分鐘。
6.?洗板：同前。
7.?每孔加入底物工作液100ul，置37?℃暗處反應15分鐘。
8.?每孔加入100ul終止液混勻。
9.?30分鐘內用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
1.?所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2.?以標準品2000、1000、500、250、125、62.5、31.2、0?pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3.?根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應MMP-7含量，再乘上稀釋倍數即可。
試劑盒性能
??1.???靈敏度：最小的MMP-7?檢測濃度小于15pg/ml。
2.?特異性：可同時檢測重組或天然的人MMP-7。不與人其它細胞因子有交叉反應。
3.?重復性：板內、板見變異系數均小于10％。
注意事項
??1.???以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。
?2.???洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致精確度誤差及OD值錯誤地升高。
??3.???板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
??4.???本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
?5.???本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！
