血液分析儀綜述(二)
3、激光散射和細胞化學染色技術
最早采用該技術的是Technicon 公司的H1,H3 型，現在的最新型為西門子公司的Advia120 型和2120 型（2007
年以前為Bayer
公司產品）。它是一款開發比較早的高等級儀器，其在白細胞分類上采用了過氧化酶測定通道和嗜堿粒細胞測定通道。根據細胞化學染色的特性進行白細胞分類。在紅細胞和血小板分析都采用了雙角度激光法。在儀器的管路、電磁閥門、反應杯上采用了獨特設計的集成液流版管路系統，是目前血細胞分析儀中所獨有和特有的技術。集成液流板實際上是將各種管路和電磁閥門、反應杯等血球計數儀的常用硬件進行綜合處理，系統化，微小化，透明化和集成化。形成的集成板被放置在儀器的明顯部位，方便觀察，并具一定的美觀效果。其另一特點則是細小的管路和反應杯可是標本和試劑用量明顯減少。
在白細胞分類上，該儀器采用兩個通道進行，一個為過氧化酶檢測通道，另一個為嗜堿細胞檢測通道。過氧化酶反應（peroxidase，POX）是血涂片染色的一個常用細胞化學染色方法，用于鑒別原始細胞與成熟的粒細胞，鑒別粒細胞與非粒細胞。染色后的細胞內無藍黑色顆粒出現為陰性反應，出現細小顆粒或稀疏樣分布的黑色顆粒為弱陽性反應，出現黑色粗大而密集的顆粒為強陽性反應。過氧化物酶主要存在于粒細胞系和單核細胞系中，各類白細胞對過氧化物酶的反應是這樣的：早期的原始粒細胞為陰性，早幼粒以后的各階段都含有過氧化物酶，并隨著細胞的成熟過氧化酶含量逐漸增強，中性分葉核粒細胞會出現強陽性反應，嗜酸性粒細胞具有最強的過氧化物酶反應，嗜堿粒細胞不含此酶呈陰性反應。在單核細胞系統，除早期原始階段外，幼稚單核和單核細胞會出現較弱的過氧化物酶反應。淋巴細胞、幼稚紅細胞、巨核細胞等都為過氧化物酶陰性反應。Advia 120/2120 血細胞分析儀的過氧化酶（Perox）檢測通道就是根據這個原理設計的，它檢測每一個通過流動計數池中的白細胞，經過激光照射所產生的過氧化酶散射光吸收率，來當然試劑和輔助試劑均進行了改良。
在Perox 通道所產生的散點圖，橫軸表示在5°-15°激光散射獲得的細胞過氧化物酶含量情況，縱軸是低角度散射光測量的細胞體積大小。在此通道內細胞被分為五類。1）過氧化酶最強陽性的嗜酸性粒細胞；2）過氧化酶強陽性的嗜中性分葉核粒細胞；3）體積較大、過氧化酶弱陽性的單核細胞；4）體積較小、過氧化物酶陰性的淋巴細胞；5)體積大于淋巴細胞且過氧化物酶陰性的未染色大細胞，此類細胞增加提示幼稚或原始的各類細胞可能出現。在嗜堿細胞（BASO）通道中采用的檢測原理是：專用的嗜堿性粒細胞試劑（BASO）將除了嗜堿性粒細胞以外的白細胞除去細胞膜，使其裸核化并體積變小，僅將嗜堿性粒細胞保持原有狀態，體積明顯大于其他類的白細胞。在散點圖上處于上面區域的為嗜堿性粒細胞；散點圖的橫坐標可表示細胞核結構的復雜性，處于左側的為單個核的細胞群，包括單核細胞和淋巴細胞；處于右側的為分葉核細胞；中間部位則考慮為桿狀核細胞；左下端為單個核的原始細胞區。
該儀器在紅細胞、血小板的測定上也采用了光學檢測技術。通過激光照射掃描每個通過Flowcell 的紅細胞，低角度散射光（2 °~3 °）用于測量細胞體積；高角度(5°～15°)散射光測量每個紅細胞內的血紅蛋白濃度（CH）和血紅蛋白含量平均值CHCM。這兩個值不受紅細胞數量和血紅蛋白測定的影響。還可根據每個紅細胞內血紅蛋白濃度，計算出紅細胞內血紅蛋白分布寬度（HDW）值。其根據紅細胞在體積大小和單個紅細胞內血紅蛋白含量的分析，將紅細胞劃分為9 個區域，得到紅細胞體積和色素含量分布的九分圖，也是該儀器在紅細胞分析方面獨有的特色，根據紅細胞分布情況可初步判斷疾病類別。在血小板計數分析上也同樣采用了二維光散射分析法，即可獲得血小板體積大小，可測量1~60fl 內的各種大小不同的血小板，還可對血小板內容物含量（MPC）進行測定。血紅蛋白測定采用連續流動比色法和紅細胞散射光直接測定法兩種方法，有助于高脂血和高膽紅素血標本的血紅蛋白測定準確性。
4、雙鞘流技術和細胞化學染色法
ABX 是法國生產血液分析儀的著名廠家，其生產的全自動血液分析儀Pentra 120
型為其高端產品。在白細胞分類上采用該公司特有的ZL技術-雙鞘流（DHSS）分析法。雙鞘流是ZL技術，而測定本身是通過電阻抗和光吸收法雙重原理。標本首先在第一鞘流液中經過電阻抗測定分析，得到細胞體積測定結果，然后通過第二鞘流引導再行光吸收率分析，對細胞內容物進行測定，最終將細胞測定信息在散射圖相應的位置表現出來。雙鞘流技術的核心部件是含有紅寶石小孔的復雜的鞘流池，在雙鞘流系統的上下兩端分別加上恒定電流，是保證電阻法的測量要素。為了保證被檢測的細胞能夠正確通過計數孔和鞘流通道，需要利用外來鞘流來進行矯正，因此通過左側鞘流泵注入稀釋液形成第一鞘流液，其作用是保護溶液能夠直接通過計數小孔，并且保證其中攜帶的細胞處于中心部位，液流不發生偏移和扭曲；溶液通過計數小孔后，再通過中間鞘流泵注入稀釋液形成第二股鞘流，用以保證吸光度測量。這樣的過程被稱為雙鞘流分析技術。
儀器通過兩個通道來完成白細胞的五項分類。其采用的細胞化學染色技術（Cytochemistry）的原理是經典的細胞分類技術，此染色劑中含有溶血素及氯唑黑活體染料（Chlorazol Black E）。在儀器的LMNE 檢測池中，全血樣品與染色劑充分混勻，在35℃條件下進行孵育，此過程的作用是：①溶解紅細胞②對單核細胞的初級顆粒、嗜酸性粒細胞和中性粒細胞的特異顆粒進行不同程度的染色，同時對細胞的膜（細胞膜、核膜、顆粒膜）也進行不同程度的著色③固定細胞的形態，使其保持自然狀態。由于淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞對染色劑的著色程度不同、每種細胞特定的細胞核形態和顆粒的結構造成光散射的強度不同，產生了特定的吸光率。
染色后的標本被引導進入鞘流池進行雙鞘流分析，首先經過60mm 紅寶石小孔進行電阻法分析，用于判斷細胞體積大小，在LMNE 散點圖上的橫坐標即可表示出細胞大小的特性。然后樣本迅速進入直徑為42mm 的第二鞘流檢測通道進行光吸收率測定，以判斷細胞形態和內容物等情況。根據每類細胞在這兩個分析參數上所表現出來的特性，形成二維分布的散點圖。在此通道內可完成白細胞中淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞和嗜酸細胞群的分類。此通道內在分析的同時還能夠檢測兩群異常白細胞亞群：巨大未成熟細胞（LIC）百分比及絕對值，異型淋巴細胞（ALY）百分比及絕對值，同時還可提供多達82 種提示和報警信息。
在LMNE 散點圖上，各類白細胞的特點是：①淋巴細胞：典型的淋巴細胞體積較小、形態規則、胞漿內沒有顆粒，其吸光率最低，所以定位在散點圖的右下部矩陣中，正常淋巴細胞散點圖為正態體積分布。②單核細胞：典型的單核細胞體積較大、腎狀核、胞漿內有初級顆粒（幾乎不著色），細胞核大且不分葉，光散射較少，所以位于吸光率軸的最下端，依據單核細胞的體積，位于體積軸的最右端，而異常單核細胞及特大單核細胞則可能出現在LIC 的矩陣中。③中性粒細胞：典型的中性粒細胞具有嗜中性顆粒及分葉核的結構，中性顆粒部分著色，同時由于顆粒及核的分葉等形態上的復雜性，而產生光散射。所以中性粒細胞群散點圖位于中部。核分葉越多的中性粒細胞，吸光性越強，在散點圖上的位置向右移。同時桿狀細胞（Bands）體積與中性粒細胞接近，但核的復雜程度低，吸光率低，散點圖位于中性粒細胞與單核細胞之間。④嗜酸性粒細胞：由于嗜酸性粒細胞含有特異性顆粒，與染色液特異性著色，其著色強度最深，位于Y-軸的最上端，此方法提高了嗜酸性粒細胞的分類的準確性。⑤巨大未成熟細胞（Large Immature Cell）：未成熟粒細胞因其體積較大，可含有顆粒，光散射強，位于嗜中性粒細胞散點圖的右側，在LIC 矩陣圖中從左到右依次排列晚幼粒、中幼粒、早幼粒細胞，另外各種原始細胞位于單核細胞的右側區域中。由于此散點圖中可能有大單核細胞，可引起LIC 假性計數增加（LIC 的計數結果被計算到在嗜中性粒細胞中）。LIC 包括：大單核細胞、高嗜堿性的單核細胞、巨大中性粒細胞、早幼粒細胞、中幼粒細胞、晚幼粒細胞、原始細胞。⑥異型淋巴細胞(Atypical Lymphs)：在散點圖中位于淋巴細胞與單核細胞之間的一群細胞，包括：小原始粒細胞、大淋巴細胞等。
在WBC/BASO 檢測池中，全血樣品與BasolyseII（PH2.4）溶血劑混合，在35°C 恒溫下，溶解紅細胞，由于嗜堿性粒細胞具有抗酸性，能夠保持形態完整，而其他白細胞胞漿溢出，成為裸核狀態。細胞通過一個直徑為80mm 的鞘流微孔時，根據電阻抗原理進行測定，以細胞體積大小為橫坐標繪制WBC/BASO 直方圖。依據閾值設定區分裸核化的白細胞與嗜堿性粒細胞。在直方圖上可以看出在中心界標左側的是細胞體積變小的其它細胞群，界標右側是體積較大的嗜堿性粒細胞。因嗜堿性粒細胞數量極少，因此在直方圖上基本見不到明顯分布曲線和峰。
紅細胞和血小板仍然采用電阻抗原理測定，血紅蛋白采用比色法。此為在軟件系統中采用了浮動界標技術用于血小板計數及嗜堿細胞計數，直方圖的界標會依據細胞群的變化做出相應的自動調整。血小板計數上還采用了防返流裝置，目的為防止渦流現象對血小板計數產生影響。在白細胞計數過程中還采用了白細胞平衡檢測原理（WBC Count Balance），使得白細胞計數在WBC/HGB 通道中與LMNE 雙鞘流池計數結果相聯系，如果出現較大差別則可進行報警提示。最近該廠推出新一代ABX Pentra DX120 型血細胞分析儀，其測定原理仍然采用雙鞘流技術。采用新技術擴展了散點圖分布范圍，形成可對血液中未成熟的粒細胞、單核細胞和淋巴細胞共20 個參數的分類或提示性報告信息，這對異常血細胞的篩檢提供了很大幫助。
5、多角度偏振光激光散射技術
美國雅培公司（ABBOTT）推出的血液分析儀，在白細胞分類中采用獨特的多角度偏振光散射（MAPSS）技術，其所生產的血細胞計數儀從CELL-DYN
3000，3200，3500，3700，4000，以及Sapphire（藍寶石），在白細胞分類上均采用了MAPSS
技術。該技術基本原理是細胞在激光束的照射下，在多個角度都產生散射光，儀器在四個角度的四個檢測器將接收到的相應的散射光信號，然后經過微處理器分析處理，將各類細胞安置在散點圖上的相應位置，并計算出白細胞分類結果。
多角度偏振光散射白細胞分類技術（ Multi—Angle Polatised Scatter Separation of white cell，MAPSS）其原理是一定體積的全血標本用鞘流液按適當比例稀釋。其白細胞內部結構近似于自然狀態，因嗜堿性粒細胞顆粒具有吸濕的特性，所以嗜堿性粒細胞的結構有輕微改變。紅細胞內部的滲透壓高于鞘液滲透壓而發生改變，紅細胞內的血紅蛋白從細胞內游離出來，而鞘液內的水分進入紅細胞中，細胞膜的結構仍然完整，但此時的紅細胞折光指數與鞘液的相同，故紅細胞不干擾白細胞檢測。在鞘流系統的作用下，樣本被集中為一個直徑30μm 的小股液流，該液流將稀釋的血細胞單個排列，然后通過激光束，激光照射于細胞上，在各個方向都有其散射光出現。0°為前向角散射（1°～3°）光，可粗略地測定細胞大小；②10°為狹角散射光（7°～11°），可測細胞結構及其復雜性的相對特征；③90°為消偏振光散射（70°`～110°），基于顆粒可以將垂直角度的偏振激光消偏振的特性，將嗜酸細胞從中性粒細胞和其它細胞中分離出來。④90°垂直光散射（70°～110°），主要對細胞內部顆粒和細胞成分進行測量。這四個角度同時對單個白細胞進行測量和分析后，即可將白細胞劃分為嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、嗜堿性粒細胞、淋巴細胞和單核細胞5 種。ABBOTT 的五分類法定量很有意思，不用傳統的體積定量，而是采用數量定量，每次計數時完成10000 個細胞測定即停止。
該類型儀器除了基本的白細胞五分類外，還提供了其它異常白細胞的信息和報警，提供給檢驗者參考，以通過人工顯微鏡檢查復核這些結果，例如異常
淋巴細胞、原始細胞、未成熟粒細胞、桿狀核中性粒細胞。國內桂林優利特公司生產的URIT系列五分類血細胞分析儀，采用相同的分類技術，經過多年的發展，在市場上得到了用戶的好評，并榮獲2013年國家高性能醫學診療設備重大專項獎。
6、激光散射技術
日本光電公司是開發和生產五分類血細胞分析儀的廠家之一，目前所知僅有兩款類型的儀器投入市場，均采用相同的測定原理，型號是MEK-7222K和MEK-8222K。其WBC、RBC
和PLT
計數原理采用電阻法，白細胞分類測定采用鞘流技術和激光散射原理。在鞘流液中白細胞通過管路進入鞘流池內，激光照射白細胞后發生的各種散射光，根據血細胞的體積、血細胞的復雜性（有無顆粒、核的構造等）的不同，散射光的強度和方向有所不同。激光直進方向和同方向小角度的散射光（表示Size）、激光直進方向和同方向大角度的散射光（表示Complexity）、與激光直進方向相對垂直的方向的散射光（表示Granularity）為參數的作為散點圖，對淋巴細胞、單核細胞、嗜中性白細胞、嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞進行分類。Size
表示血細胞的大小、Complexity 表示白細胞結構的復雜度、Granularity
表示白細胞顆粒的程度。采用此原理可提供了三個散射圖，MAIN 散點圖、NE-EO 散點圖和MO-BA 散點圖。在MAIN
散點圖上（大圖部分）下面散點表示淋巴細胞群，右側為粒細胞群；兩個小圖，NE-EO 為中性粒細胞和嗜酸性粒細胞散點圖，MO-BA
為單核細胞和嗜堿性粒細胞細胞散點圖。此外儀器還能給出大的不成熟細胞（LIC）提示信息。
7、邁瑞激光散射和細胞化學染色技術
邁瑞（MINDRAY）公司是國內最早有能力生產五分類血細胞分析儀的廠家，他們目前生產的五分類血細胞分析儀、BC-5800
檢測速度快：全自動進樣90個樣本/小時，開放進樣80個樣本/小時型自動五分類血液細胞分析儀，采用半導體激光散射技術和細胞化學染色技術，配合改良的流式分析裝置對白細胞進行精確的五分類分析。BC-6900
檢測速度：最高125 個標本/
小時為目前最高配置，可選擇使用靜脈血或預稀釋末梢血，均能獲得良好的各種細胞計數結果和白細胞五分類結果。具有血液和體液檢測功能，有六個通道、九種模式。
鞘流技術是所有高檔血細胞分析儀均采用的細胞進樣技術，為了達到更高的液流速度壓力差和更穩定的液體流動，該公司獨創性地采用了二次加速鞘流技術，分級實現鞘液的第二次加速，增加了單位時間內細胞的通過流量，從而能夠完成對預稀釋血液進行白細胞五分類分析。
儀器通過兩個通道完成白細胞分類測定。在DIFF 通道中增加了利用了可對嗜酸性粒細胞進行染色的特殊試劑。激光散射分析技術是五分類法常用的分析技術，由于細胞的物理特性，當激光照射到細胞時，會有不同角度的散射光出現。低角度(1°~5°)散射光可反映細胞體積大小信息；中高角度(10°~20°)散射光可反映細胞顆粒的復雜性信息。綜合這兩個角度散射光的信息，結合其他特殊技術來完成白細胞的五分類測定。標本在鞘流的帶動下進入儀器的檢測區域后，激光照射于細胞之上所發射出的低角度和中高角度散射光信號可表現出細胞大小和內容物復雜程度（包括細胞內顆粒等）的特性信息，經儀器檢測分析，將其分布在一個二維空間的散點圖中，可區分淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞。而化學染色技術可進一步實現對嗜酸性粒細胞的準確判定。
在WBC/BASO 通道中通過強溶型試劑和特異性染色技術，可保留完整的嗜堿性粒細胞，并對其進行特異性修飾，同時破壞其它四類白細胞，使之形成膜包核狀態，在激光的照射下同樣形成兩個角度的散射光，完整的嗜堿性粒細胞體積偏大，其他類別白細胞體積變小，通過激光信號的強弱來計數嗜堿性粒細胞并在該通道中計數白細胞總數。該方法可以有效排除難溶性紅細胞、巨大血小板、血小板聚集及其它非細胞顆粒等因素對計數的影響，保證嗜堿性粒細胞及WBC 總數的精確分類和計數。
第五節核酸熒光染色技術在血液分析儀的最新應用
一、概述
目前，五分類血液分析儀已經為許多大中型醫院實驗室所使用。五分類儀器不同于三分類儀器的主要區別在于：為了精確定量地檢測白細胞的五種成份，各種五分類血液分析儀開始采用多種物理學原理（電阻抗、光散射、高頻波技術），甚至設置專用檢測通道和化學染色方法檢測數目最少的嗜酸、嗜堿性粒細胞。
而高檔次的五分類血液分析儀，除了檢測正常白細胞五項分類以外，還致力于高靈敏地檢測幼稚、異常成份。對于外周血中的幼稚成份，過去一般依賴于顯微鏡鏡檢。而普通血液分析儀對異常標本報警的靈敏度有限，常常造成漏報。或者為了減少這種情況而提**性報警率（通過降低儀器報警的閾值），提高了復片的比例從而造成假陽性率偏高，失去了過篩的意義。鑒于以上這些問題， SYSMEX 近年來開始致力于通過化學染色方法對幼稚成份的標本進行自動化檢測，這相對于一般的陽性報警（即提供一種可能性）要進步了很多。
對于紅細胞系統，幼稚成份主要是網織紅細胞和有核紅細胞檢測，提供定量的參數甚而可以對RET 成熟度作進一步的分類。在白細胞中，幼稚成份根據形態學的不同包括原始細胞、核左移細胞、幼稚粒細胞、異常/ 異型淋巴等。能否采用特殊的方法學（如核酸染色方法）高靈敏度地測得幼稚白細胞的存在，甚至提供定量的參數，是儀器優劣的標志之一。除了幼稚細胞以外，其它一些異常標本的檢出率和準確性也通過技術的進步而得到提高。對于巨大血小板、血小板凝集、小紅細胞或細胞碎片等標本，使用傳統的電阻抗原理往往無法準確測的，而新的核酸染色技術結合光學流式原理則可以較好地解決。因此，可以靈敏、準確地檢測出幼稚的紅、白細胞存在（而非提供可能性），并具有血小板的形態辨識功能，成為血液分析儀發展的最前沿的功能。
二、核酸熒光染色技術
1.在白細胞系分析的應用
a. 正常五項分類的分析應用
由于電阻抗原理的局限性，二分群、三分群儀器都無法準確地檢測出淋巴、單核、嗜酸性、嗜堿性、嗜中性細胞。為了能夠從細胞體積大小到內部結構全面分析細胞并得到準確的白細胞分類結果，各種型號的五分類儀器采用了各項技術聯合應用于血液細胞的分析，包括物理原理（電阻抗、散射光、高頻波/
射頻等）、化學原理（特異性溶血、普通顆粒染色、酶染色、核酸染色）。
在最新推出的SYSMEX XE-2100 系列、XT-2000i/1800i 系列五分類血液分析中，半導體激光作為光源將光束照射在流式細胞室內的白細胞，通過不同角度的散射光可以反映細胞外部的體積和內部顆粒復雜程度的信息。其中側向信號用以反映細胞內部信息（主要是顆粒的復雜性）。試劑中增加了特異性針對DNA/RNA 染色的熒光染料Polymethine( 聚次甲基染料) 。激光照射后產生熒光信號，和側向散射光一道繪制成二維散點圖進行白細胞分類。
b. 幼稚白細胞分析的應用
白細胞中的幼稚成份在臨床上具有顯著意義。過去，此類標本主要依靠人工鏡檢。隨著血液分析儀檢測技術的發展，儀器對于幼稚白細胞的報警提示越來越靈敏。
通過一些特異性的化學手段，五分類儀器還可以進行幼稚白細胞的定量檢測。SYSMEX XE/XT
系列采用核酸熒光染色后，根據細胞成熟度的不同可以體現在其熒光信號的強弱上，其白細胞分類通道出正常細胞分類外，還有兩個幼稚白細胞的定量參數： IG
（幼稚粒細胞）和Other （原始細胞/ 異常淋巴）。臨床研究表明IG
可以作為感染性疾病、白血病、炎癥的有用參數，另外也提示治療的預后和療效監測
2. 在紅細胞、血小板系分析的應用
a. 光學染色法檢測PLT
通過光學技術，可以在一定程度上改善電阻抗原理僅僅判斷細胞體積所帶來的局限性，提高了紅細胞和血小板的準確性。而現代生物染色技術的發展，使更加特異性的核酸染色法與光學技術結合成為可能。在SYSMEX
XE-2100 、XT-2000i
血液分析儀上，檢測血小板的方法增添到兩種。儀器的紅細胞和血小板檢測通道采用鞘流電阻原理，常規標本即以此為檢測手段。當一些特殊標本混有大型血小板或小球性紅細胞時，二者之中會有一部分具有相同的體積使電阻法無法準確區分，儀器還可以使用光學染色法檢測(633nm
波長的半導體激光束，染料為Plymethine 和Oxazine) 。血小板由于體積較小，但顆粒中存在有少量RNA
，被染料輕微著色而激發出熒光，此時得到的血小板結果更加可信。
b. 網織紅細胞分析
網織紅細胞是晚幼紅細胞脫核后與成熟紅細胞之間的過渡細胞，是反映骨髓造血功能的重要指標。目前用自動分析儀進行網織紅細胞分析的技術已經取得很大進展。隨著五分類儀器技術日臻發展，
Sysmex XE-2100 、XT-2000i 具備了內置式的全自動網織紅檢測功能。采用激光流式原理和細胞核酸染色。除了進行自動的RET
數目和百分比計數外，還可以通過核酸染色得到的熒光信號強度區分低、中、高熒光強度的網織紅（ LFR 、MFR 、HFR
）。由于幼稚的網織紅熒光信號較強， MFR 和HFR 之和即反映未成熟網織紅的一個有用參數。
桂林優利特公司研發的URIT系列五分類血細胞分析儀，全系產品具有網織紅細胞檢測功能，提供網織紅細胞計數RET、網織紅細胞比率RETIC和未成熟網織紅細胞值IRF三項參數。
c. 有核紅細胞分析
有核紅細胞作為幼稚的紅細胞在治療監測和鑒別診斷時有重要臨床意義。而且，有核紅細胞體積與淋巴細胞相仿或略小，大多數儀器對這樣的標本往往會誤計，這樣不但漏報了病理標本，而且造成白細胞（淋巴細胞）結果假性升高。隨著五分類儀器的出現，儀器報警系統開始可以提示其存在的可能性，供操作人員鏡檢復核。
真正采用染色手段來自動化地定量檢測有核紅細胞的功能，出現在SYSMEX XE-2100 和XE-2100L 上。XE-2100 儀器單獨設置檢測有核紅細胞的通道，特殊的溶血素將紅細胞完全破壞，有核紅細胞被裸核并收縮，而白細胞被保留。核酸熒光染色Polymethine 對標本染色后，白細胞細胞核和胞質內核酸的染色總量遠大于同樣被染色但被收縮的有核紅細胞，通過半導體激光照射后熒光信號和前向散射光信號均有區別。由此準確計得有核紅細胞數目及占白細胞的比例。
