提質粒步驟
質粒提取主要包括三個步驟:
1、菌體擴繁。
2、菌體裂解釋放質粒DNA。
3、質粒DNA的分離與純化。
質粒提取辦法中,最常用的是堿裂解法,它具有得率高,適用面廣,快速,純度高等特色。
其原理是:強堿(pH12.0-12.6)環境下,SDS損壞細胞壁并裂解細胞,一同使宿主細胞的蛋白質、染色體及DNA發生變性,而質粒DNA因為其分子量小而纏結嚴密不易變性。
pH調至中性時可恢復天然構象,在高鹽條件下,細胞碎片、變性的蛋白質和染色體DNA發生沉積,離心后可去除。
上清中的質粒DNA可經過乙醇沉積或許硅膠膜特異性吸附等方法,將質粒DNA從上清中回收。
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