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    紅細胞裂解液(RBC Lysis Buffer,10×) 操作步驟

    2021.6.02

    、組織細胞樣本的常規操作

    1、制備細胞懸液: 新鮮組織經過胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,通過適當方法制備成細胞懸液,離心棄上清。

    2、裂解: 加入1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~2min。 3、離心,棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

    4、如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3各一次。

    5、洗滌:根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻重懸沉淀。4℃離心,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。

    二、組織細胞樣本的快速操作(無需洗滌)

    1、制備細胞懸液:新鮮組織經胰蛋白酶或膠原酶等消化處理,制備細胞懸液,離心棄上清。

    2、裂解:加入細胞5倍細胞沉淀體積的1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻裂解。

    3、加入PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻。

    4、離心5min,棄紅色上清,本離心步驟亦可在室溫下操作。

    5、如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2~4各一次。

    6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。
    三、血液樣本的快速操作(無需洗滌)

    1、新鮮抗凝血中加入10倍體積的1×RBC Lysis Buffer,輕輕吹打混勻,裂解4~15min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

    2、加入 PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻。

    3、離心,棄紅色上清。4℃離心效果更佳。

    4、如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。

    5、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。

    四、血液樣本的常規操作

    1、取新鮮抗凝血,離心,棄上清。

    2、 裂解:加入1×RBC Lysis Buffer,輕柔吹打混勻,裂解1~5min。本操作步驟在4℃條件下操作更佳,亦可在室溫下操作。

    3、離心:棄紅色上清。本步驟亦可在室溫下操作。

    4、如果發現紅細胞裂解不完全,可以重復上述步驟2和步驟3一次。

    5、洗滌: 根據實驗要求加入適量PBS、HBSS、生理鹽水或無血清培養液,輕柔混勻重懸沉淀;4℃離心,棄上清,該離心步驟亦可在室溫下操作。

    6、根據實驗需要用適當溶液重懸細胞沉淀,進行計數、培養等后續實驗。




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