吞噬細胞吞噬功能檢測
實驗方法原理 吞噬細胞具有對異物(細菌、綿羊紅細胞、雞紅細胞等)吞噬和消化的功能,在機體非特異性免疫中發揮重要作用。
小鼠腹腔內注射硫代乙醇酸鈉,可刺激巨噬細胞的聚集。四日后小鼠腹腔內注入羊紅細胞懸液,一小時后解剖收集腹腔吞嗜細胞,染色、鏡檢可觀察對羊紅細胞的吞嗜現象。通過計算吞嗜百分比或吞噬指數可測定吞噬細胞的吞嗜功能。
實驗材料 ICR小鼠
試劑、試劑盒 PBS緩沖液硫代乙醇酸鈉羊紅細胞懸液瑞氏染液甲醇
儀器、耗材 解剖器材注射器尖吸管橡皮吸頭試管載玻片
實驗步驟
1. ?實驗準備:用無菌注射器吸取3 %硫代乙醇酸鈉3 ml,注射于小鼠腹腔內。
2. ?四日后,注射1 %羊紅細胞懸液1 ml 于小鼠腹腔內。
3. ?注射1 小時后,將小鼠用頸椎脫臼法處死,解剖暴露腹腔,于腹腔靠上部位,用鑷子輕輕夾起腹膜,將腹膜剪一小口,用尖吸管注入5 ml 預溫的PBS,同時用手反復揉搓腹腔約1—2 分鐘,以便盡可能多地沖洗出小鼠腹腔的吞噬細胞。
4. ?用尖吸管吸取腹腔液,置一潔凈試管內。
5. ?用尖吸管將腹腔液吹打均勻(盡量避免產生氣泡),吸取一滴滴于載玻片上,加蓋玻片鏡檢。
6. ?觀察結果,也可以將腹腔液涂片,平放于濕盤內,37 ℃,孵育30 分鐘。取出涂片,用預溫的PBS 沖洗3次,然后用甲醇固定1 分鐘,以瑞氏染液1 份加pH6.4 的PBS 2 份混勻后,滴于涂片上染色5-10 分鐘,以蒸餾水沖洗(切勿先將染液傾去)后,待干,鏡檢。
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注意事項
1. ?充分揉搓腹腔,盡可能將吞噬細胞沖洗下來。
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2. ?用尖吸管吸取腹腔液時,盡量避開腹腔臟器,避免損傷血管引起出血,影響實驗結果。
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3. ?用瑞氏染液染色時,切勿先將染液傾去后再沖洗,以免染液中細小顆粒附著于玻片上影響標本的清晰度。
其他
一、實驗結果
觀察小鼠腹腔巨噬細胞和中性粒細胞對羊紅細胞的吞噬現象,計算吞噬百分比,即每100 個吞噬細胞中吞噬有羊紅細胞的細胞數。也可用吞噬指數表示,即將100 個吞噬細胞中所吞噬羊紅細胞的總數除以100,即為吞噬指數。吞噬百分比和吞噬指數一般是平行的。