自動化熒光免疫分析系統—時間分辨熒光免疫分析儀
時間分辨熒光免疫分析儀
(一)原理
屬于非均相熒光免疫測定,鑭系元素屬于三價稀土離子,包括銪(Eu3+),釤(Sm3+),鋱(Tb3+),釹(Nd3+)和鏑(Dys+)等,它們的熒光壽命較長,尤其是Eu3+和Tb3+的熒光壽命特別長且熒光強。因此,時間分辨熒光免疫測定中多用Eu3+和Tb3+為標志物。以鑭系元素(尤其是銪(Eu3+))標記抗原或抗體作為示蹤物,它的激發光譜帶較寬,發射光譜帶窄,來自生物樣品的熒光干擾少。激發光譜和發射光譜之間的位移大,能有效地分開激發光和發射的熒光。
(二)分析物解離增強原理
被鑭系元素標記的抗體或抗原形成IC在弱堿性反應液中經激發后的熒光信號較弱,必須再加入增強液,使IC的pH降低至2~3,以利于Eu3+從復合物上解離,游離的Eu3+與另一種螯合劑結合,形成高強度熒光的穩定螯合物,又將該技術稱為解離增強鑭系元素熒光免疫(DELFIA),這是目前在時間分辨熒光免疫分析中應用最多的一種分析系統。
(三)注意事項
1.TRFIA分析用的酸性增強液易受環境、試劑、容器等里面的鑭系元素污染,使本底升高,所用試劑和器材應盡量防塵。
2.載體最常用的是聚苯乙烯微96孔板,其熒光本底低。
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