關于基因轉移轉染細胞的處理方法介紹

　　①如果不進行其它處理（如用氯喹、甘油或丁酸鈉等試劑處理，見后），可在細胞培養16～24h后，吸出培養液和沉淀物，用PBS將單層細胞再洗一次。然后按下述③d操作。

　　②在許多情況下，同時用氯喹處理細胞，可提高DNA攝入率。氯喹可能是通過抑制溶酶體水解酶類對DNA的降解而起作用的。氯喹濃度及其處理時間不能超越細胞對其毒性作用的耐受能力。因此必須通過預實驗來決定適于所用特定型別細胞的最佳氯喹濃度。但對于大部分型別的細胞，用終濃度為100μmol/L的氯喹處理3～5h，都可取得良好效果。可在磷酸鈣-DNA共沉淀物加入細胞之前或之后（見步驟（4）介紹的其它方法），直接將氯喹二磷酸貯存液（過濾除菌并貯于-20℃用金屬泊密封的管中，100mmol/L）稀釋（1：100）于培養液中。在氯喹處理過程中，細胞呈現泡狀是正常的。經用DNA和氯喹處理3～5h后，棄去培養液和沉淀，用PBS洗，然后按下述d操作。

　　③用甘油短暫處理細胞，同樣可提高轉化效率或導入DNA的瞬時表達水平。這一步驟可以在氯喹處理之后進行。由于不同細胞對甘油的毒性作用的敏感性相差懸殊，因此每種型別的細胞都必須通過預實驗決定最佳處理時間（從30s至3min）。耐受甘油的細胞可以暴露于含磷酸鈣-DNA共沉淀物（含或不含氯喹）的生長液3～5h后進行休克。

　　a. 吸出生長液，用PBS將單層細胞洗1次

　　b.在單層細胞中加入1.5ml溶于1×HBS的15%甘油，在37℃培養0.5～3min

　　c.吸出甘油，用PBS將單層細胞洗1次

　　d.加入5ml預加溫的完全生長液，放入培養箱中繼續培養24～60h后，檢測DNA的瞬時表達或將細胞重新種入適當的選擇性培養基中，分離穩定的轉化體。

　　④業以表明，丁酸鈉也可以在猴源和人源細胞中增強帶SV40早期啟動子/增強子的重組質粒的表達。可直接在生長液中加入有關試劑，也可以使經過甘油休克的細胞接受丁酸鈉處理。須視細胞型別的不同，采用不同濃度的丁酸鈉（500mmol/L貯存液，在化學通風櫥中用NaOH中和丁酸制備而成），例如：

　　CV-1

　　10mmol/L

　　NIH-3T3

　　7mmol/L

　　HelaS3

　　5mmol/L

　　CHO

　　2mmol/L

　　不加完全生長液，然后重復步驟d。