核酸的定量測定實驗——二苯胺法
| 實驗方法原理 | DNA 分子中2-脫氧核糖殘基在酸性溶液中加熱降解, 產生2-脫氧核糖并形成ω-羥基-γ-酮基戊醛, 后者與二苯胺試劑反應生成藍色化合物, 其反應為：
藍色化合物在595 nm 處有最大吸收峰, 且DNA 在40～400 μg 范圍內時, 光密度與DNA 濃度呈正比。在反應液中加入少量乙醛, 可以提高反應靈敏度。 |
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| 實驗材料 | |
| 試劑、試劑盒 | |
| 儀器、耗材 | |
| 實驗步驟 | 1. ?標準曲線的繪制: 取干燥試管6 支, 編號, 按下表加入試劑。 ?
加完后混勻, 于60 ℃恒溫水浴中保溫1 h , 冷卻后于595 nm處比色測定, 以零號管調零點。以DNA 濃度為橫坐標, 光密度為縱坐標, 繪制標準曲線。
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