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    血清白蛋白溴甲酚綠法測定實驗

    2020.8.10
    實驗方法原理在pH4.2的緩沖液中,白蛋白作為一種陽離子,結合陰離子染料溴甲酚綠(BCG)形成藍綠色化合物,在波長630nm處有吸收峰,其吸光度與白蛋白濃度成正比例,與同樣處理的白蛋白標準液比較可求得血清中白蛋白含量。
    實驗步驟

    一、實驗試劑。

    1、0.5mol/L琥珀酸緩沖貯存液(PH4.0)溶解Na0H? 10g琥珀酸 56g于 800m1蒸餾水中,用1mol/L氫氧化鈉調至pH4.1+0.05加水稀釋至1000ml此液置4℃冰箱保存.

    2、BCG已存液(10mol/L):溶解BCG(MW=720.22)1.80g于5m1? Na0H中用蒸餾水稀釋至250ml.

    3、疊氮鈉貯存液:溶解疊氮鈉40g于1000ml蒸餾水中。

    4、聚氧化乙烯月桂醚(BYij-35)貯存液溶解2.5g聚氧化乙烯月桂醚于80ml蒸餾水中,加熱助溶然后加蒸餾水至10ml.

    5、BCG試劑:與1L容量瓶中盛蒸餾水約400m1,加琥珀酸緩沖貯存100ml,用吸管準確加入BCG貯存液8.0m1,并用蒸餾水將吸管壁上殘留的少量染料沖洗到液體中加疊氮鈉25ml,聚氧化乙烯月桂醚25ml最后用蒸餾水稀釋到刻度,配好BCG試劑應為4.15土0.05。

    6、40g/L白蛋白標準應用液

    二、實驗操作:按下表進行

    波長630nm。用空白管調零,用定量加液器加BCG應用液與血清標本混合后,立即在30土3S,讀取吸光度,如果標本混濁可做標本空白管(血清0.02m1加琥珀酸緩沖液40ml)以琥珀酸緩沖液調零測定標本空白管吸光度,測定管吸光度減去標本空白管吸光度后計算結果.

    三、實驗操作:按下表進行


    四、計算:

    血清白蛋自(g/L)=測定管吸光度/標準管吸光度×標準管白蛋白濃度(g/L)

    同時測定血清標本的總蛋白濃度,減去血清白蛋白濃度,即得血清球蛋白濃度,并可計算血清白、球蛋白比值.

    參考值:35-55g/L

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    注意事項

    1、實驗證明BCG不但與白蛋白顯色,而且與各種蛋白成分顯色其中以球蛋白、轉鐵蛋白、融珠蛋白更為顯著,其反應度較該蛋白稍慢,故有人主張用定值參考血清作標準比較理想,BCG與血清特異結合后,在此30秒讀取吸光度,可明顯減少非特異性結合反應.

    2、當60g/L白蛋白標準與BCG結合后,溶液光徑1.0cm。,在630nm測定的吸光度0.811士0.035,。如達不到此值,表示靈敏度較差。

    3、此法測定正常血清標本的批間異系數-6.3%左右.

    4、試劑中的聚氯化乙烯月桂醚也可用其它表面活化劑代替,如吐溫-20等,用量為2ml/L。


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