絕對計數的原理及意義
原理
干細胞計數是根據血液中不同血細胞的特性，選擇特異性標記物，采用多參數分析的方法，排除細胞之間的干擾，識別出不同的細胞并分類計數。具體而言，針對干細胞核酸含量高、大小與大淋巴細胞相近、粒度與淋巴細胞相似、CD45 表達弱、CD34 表達強的特點，首先可通過核酸染料標記所有的有核細胞(包括白細胞和幼稚的紅細胞)，排除細胞碎片及無核細胞；其次通過抗CD45抗體標記所有白細胞，并根據CD45表達強度的不同區分不同的白細胞，從而排除CD45表達強的細胞，避免CD45弱表達細胞的丟失；然后用抗CD34抗體標記CD34陽性表達的細胞，即干細胞。總之，通過核酸量、SSC的強度、CD45和CD34的表達量等多個參數將干細胞與淋巴細胞、單核細胞、粒細胞、死細胞、細胞碎片、血小板團塊以及紅細胞區別開來。
同時，樣品管中還加有已知數量的三色標記的易于與細胞區分的熒光微球作為絕對計數的內標。根據所采集到的干細胞數與熒光微球數目的比值，再乘以樣品管中的熒光微球數，即為樣品管中干細胞的數目，再除以樣品的體積，即可求得樣品中干細胞的濃度。
意義
對于有劑量要求的干細胞移植方案而言，精確的干細胞計數顯然十分重要。研究表明，需要輸入病人體內的 CD34陽性細胞量取決于病人的體重，每公斤體重應輸入2百萬至5百萬個CD34陽性細胞。此重要性也顯示在動員及白細胞分離過程中，如通過計數細胞水平判斷動員是否成功、何時為最佳采集時間以及采集到的干細胞數量是否足夠等等。由于干細胞所占的比例很小，在外周血中不到0.1%，在骨髓中也只占單個核細胞的1%至4%，因此利用流式細胞儀在大量細胞中快速準確地篩選并測出干細胞的絕對數量對于干細胞移植具有重要意義
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