細胞融合實驗的實驗步驟介紹

　　1. DMEM或1640基礎培養基、PEG溶液置于37℃水浴中預溫；

　　2. 將Balb/c小鼠摘眼球處死后，浸入75%灑精；

　　3. 無菌取免疫小鼠的脾臟；

　　4. 脾臟用PBS洗滌后，放入無菌過濾的網篩，再把網篩放在盛有完全培養基的玻璃平皿中用研磨棒（或注射器針管）輕輕研磨或擠壓，使其通過網篩；

　　5. 將培養皿中的細胞懸液吸出，放入離心管中，1200rpm/min，離心5min；

　　6. 收集2×10^7個生長良好的SP2/0細胞，與1×10^8個脾臟細胞混合于透明塑料離心管中；

　　7. 用RPMI1640洗滌混合細胞兩遍，1000rpm離心8min后，棄盡上清并用手指彈擊管底，使兩種細胞充分混勻成糊狀；

　　8. 將塑料管置于37℃保溫杯中，吸取1ml經37℃預溫的50%的PEG溶液，將吸管輕輕插入細胞底部，在1min內勻速加完，且邊加邊輕輕攪拌；

　　9. 在水浴中靜置90s，再加入40ml 37℃預溫的DMEM基礎培養基，室溫靜止5min后離心（1000rpm×10min），棄去上清；

　　10. 將沉淀細胞輕輕用40ml含1%HAT、15%FCS的DMEM培養懸浮。混勻后滴加在上述含有滋養細胞的96孔培養板中，100μl/孔，置于37℃、5%CO2培養箱中培養；

　　11. 3~4d后半量換液，10d后改用HT培養基培養，2周后轉用含15%FCS（胎牛血清）的DMEM培養基培養。

　　12. 培養結束后，顯微鏡觀察融合細胞。