毛細管電泳SELEX 技術(CE-SELEX)技術篩選適配體的介紹
不同組分間的荷質比存在一定差異,導致物質的電泳遷移率有所不同,從而實現不同組分的分離。CE-SELEX 能在2-4輪內實現高親和力適配體的篩選,常被用于篩選蛋白質、脂多糖、多肽等大分子物質。Yang等首次利用 CE-SELEX 實現了對小分子物質甲基嗎啉的適配體的篩選,經過3輪篩選后獲得了8條高親和力適配體,其解離常數為到幾百nM 到幾uM,其中兩條序列能夠催化中卟啉的金屬插入反應,催化強度分別為1.7倍和2倍。針對親和力較弱的適配體與靶標體系存在動態解離平衡這一問題,科研工作者發展了平衡混合物的非平衡毛細管電泳(NECEEM)、平衡混合物的平衡毛細管電泳(ECEEM)和 Non-SELEX 毛細管電泳技術。Ashley 等應用 Non-SELEX 技術篩選獲得過氧化氫酶的適配體,作者應用熒光分光廣度計與毛細管親和力電泳表征了其親和力與特異性,結果顯示適配體對靶標的親和力比與其他四種蛋白的親和力高至100倍,也顯示了其高特異性。該適配體可應用于生物傳感器、免疫印跡與生物標志物鑒定。Ashley 等又基于 NECEEM 和 SELEX 技術篩選獲得在自由的三維空間環境的人類瘦素蛋白的適配體,其解離常數為幾百 nM。
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