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    免疫細胞的分離

    2021.12.03

      免疫細胞的分離:

      (1)外周血單個核細胞的分離

      外周血中單個核細胞(淋巴細胞和單核細胞)的比重與紅細胞、多核白細胞及血小板不同,介于1.075-1.090之間,因而可利用一種比重介于1.075-1.092之間而近于等滲的溶液作密度梯度離心,使一定比重的細胞按相應密度梯度分布而加以分離。常用的分層液有Ficoll與Percoll兩種。

      (2)淋巴細胞的分離

      1)純淋巴細胞群的采集:利用單核細胞在37℃和Ca2+存在時,能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性,從單個核細胞懸液中除去單核細胞,從而獲得純淋巴細胞群。主要的方法有:①粘附貼壁法;②吸附柱過濾法;③磁鐵吸引法。

      2)淋巴細胞亞群的分離原則:選擇純化所需細胞的方法是陽性選擇法,而選擇性去除不要的細胞,僅留下所需的細胞為陰性選擇法。常用的方法包括:①E花環沉降法;②尼龍毛柱分離法;③親和板結合分離法;④磁性微球分離法及熒光激活細胞分離儀分離法。

      (3)淋巴細胞的保存與活力測定

      ①短期保存技術:短期保存可置于4℃保存。

      ②長期保存技術:液氮深低溫(-196℃)環境保存細胞,加入二甲亞砜作為保護劑。

      ③活力測定:最簡便常用的為臺盼藍染色法,呈藍色。

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