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    分析測試百科網 > 行業資訊 > 技術原理

    醋酸鈉乙醇沉淀法核酸純化實驗

    2019.4.13
    實驗方法原理核酸是多聚陰離子的水溶性化合物，可以與許多1價、2價離子結合形成鹽類，后者在有機溶劑中不溶解也不變性．在較低溫度下形成沉淀．
    實驗材料

    待純化樣本

    試劑、試劑盒

    醋酸鈉緩沖液無水乙醇70%乙醇

    實驗步驟

    實驗試劑：

    1. 3mol／L醋酸鈉緩沖液，pH5.2：稱取醋酸鈉（NaAC·3H20）408.1g，由于800ml水中，用冰醋酸調節至pH5.2，加重蒸餾水至1000ml．分裝后高壓滅菌（以下稱3mol/L醋酸鈉緩沖液）．

    2．無水乙醇及70％（V／V）乙醇．

    實驗操作：

    1. 將含核酸的溶液用移液器轉至一新的Eppendorf離心管，同時測量合算溶液的體積．

    2. 加入1／10體積的3 mol／L醋酸鈉緩沖液。使醋酸鈉的終濃度為0.3mo1/L．

    3. 下顛倒混勻后，準確加入2倍體積（RNA為2.5倍體積）的預冷無水乙醇，顛倒混勻，置冰浴中15－30 min或一20℃30 min。

    4. 4℃12000 r／min，離心15 min．

    5. 手持Eppendorf成45度角，使核酸沉淀面向上，用微量移液器或連接真空泵的吸頭不可接觸沉淀物．

    6. 向管中加入預冷的70%乙醇至2／3體積．混勻漂洗，以除去殘余的鹽．

    7. 4℃12000 r／min離心 2min，如步驟5吸取上清液．

    8. 不蓋管蓋置室溫10－l5min或真空中2 min，使乙醇揮發。

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