不同細胞培養基的除菌方式及注意事項
細胞培養基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌,不同的培養基由于其營養成份不同,滅菌方式也可能不同。
某些培養基(如MEM)可進行高壓滅菌,這類培養基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉,一般是在培養基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽(如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)代替L-谷氨酰胺。可高壓滅菌的培養基在121℃、15 psi,15分鐘的條件下完全可達到滅菌效果及營養成分的最小損失,不需將滅菌時間延長。
絕大多數細胞培養基不適宜高壓滅菌。因培養液中常含有維生素、蛋白質、多肽、生長因子等物質,這些物質在高溫或射線照射下易發生變性或失去功能,因而上述液體多采用過濾消毒以除去細菌。可供過濾滅菌使用的濾膜很多,其材料多為polyethersulphone(PES)、尼龍、多聚碳酸鹽、醋酸纖維素、硝酸纖維素、PTFE、陶瓷等。膜過濾除菌是當前較為常用及便捷的一種方法,常采用0.2 μm孔徑的濾膜,部份采用0.1 μm孔徑。與高壓過濾方式相比,濾膜具有使用期限且價格較高,但對細胞培養基的營養成份破壞性較小。
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