LX-2（人肝星狀細胞）復蘇、傳代和凍存方案【通過STR鑒定】
LX-2（人肝星狀細胞）【通過STR鑒定】
規格：1×10?cells/T25培養瓶
細胞名稱 | LX-2（人肝星形細胞） |
種屬 | 人 |
生長特性 | 貼壁 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
生長培養基 | DMEM高糖＋10% FBS＋1% P/S |
培養條件 | 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃ |
一、復蘇
?把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2.?把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中（用培養基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細胞都洗下來），1000轉離心5分鐘。
3.?把上清液倒掉，加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動，使培養皿中的細胞均勻分布。
4.?標好細胞種類和日期、培養人名字等，放到CO2培養箱中培養，細胞貼壁后換培養基。
5.?3天換一次培養基。
二、傳代
培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。
2.?把原有培養基吸掉。
3.?加適當的胰蛋白酶（能覆蓋細胞就行），消化1-2分鐘。
4.?細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養基終止消化。
5.?用移液槍吹打細胞，把細胞都懸浮起來。
6.?把細胞吸到15ml的離心管中，1000轉離心5分鐘。
7.?倒掉上清液，加1-2ml培養基，把細胞都吹起來。
8.?根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般，癌細胞分5個，正常細胞傳3個。繼續培養。
三、凍存
把細胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細胞種類，凍存日期。4℃?30min，-20℃?30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。
凍存液的配制：?70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
要注意的就是無菌操作！
