transwell實驗染色后可以放多久
最好是24小時。
實驗前將保存在-20℃的基質膠轉移至4℃冰箱融化過夜，使用前用無血清培養基按培養基：基質膠=2:1的比例稀釋；接種前將24孔板和Transwell小室用1×PBS浸泡5min濕潤小室。用胰蛋白酶消化細胞后，用無血清培養液洗滌細胞，用含有1%FBS的培養基重懸細胞計數。培養24h后（侵襲實驗培養48h后），每孔加入1mL4%溶液，室溫固定10min；染色：吸去固定液，用1×PBS洗滌一次，每孔加入1mL0.5%結晶紫溶液，染色30min后用1×PBS洗三次，晾干；觀察：用棉簽小心擦去Transwell小室內沒有遷移的細胞，置于200×顯微鏡下觀察，計數每個視野中的細胞數。
將小室放入培養板時，要注意不要有氣泡產生，因為一旦有氣泡，下層培養液的趨化作用就減弱了。用棉簽小心擦去Transwell小室內沒有遷移的細胞時，不能碰到已經穿膜的細胞。難穿膜的細胞可以用無血清培養基饑餓處理12-24h。
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