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M 其他相關 問題集目錄 Q-1：使用IPTG（Dioxane free）時需要注意什么?································································2 Q-2：使用X–Gal時需要注意什么?·····················································································2 Q-3：使用DEPC處理水（RNase Free）時需要注意什么?·····················································2 Q-4：使用10×Loading Buffer時需要注意什么?·································································2 Q-5：使用6×Loading Buffer時需要注意什么?···································································2 Q-6：使用核酸共沉劑時需要注意什么?·················································································2 Q-7：使用E.coli Competent Cells JM109/DH5α時需要注意什么?·······································2 Q-8：使用E.coli Competent Cells HB101時需要注意什么?·················································2 Q-9：使用電轉化感受態細胞時需要注意什么?·······································································3

Q-1：使用IPTG（Dioxane free）時需要注意什么? A-1：使用IPTG（Dioxane free）時需要注意如下事項： 1. 培養噬菌體時，Top agar中的添加量為：25 μl/3 ml（IPTG濃度為24 mg/ml時）。 2. 含有IPTG的培養基4℃避光保存，須在1~2周內使用。 3. 因IPTG對各種載體的誘導活性有差異，所以，在進行大規模誘導培養時，請先進行小試實驗。 Q-2：使用X–Gal時需要注意什么? A-2：使用X–Gal時需要注意如下事項： 1. 培養噬菌體時，Top agar中的添加量為：50 μl/3 ml（X-Gal濃度為20 mg/ml時）。 2. 含有X-Gal的培養基4℃避光保存，須在1~2周內使用。 3. 使用DMF（二甲基甲酰胺）溶解。 Q-3：使用DEPC處理水（RNase Free）時需要注意什么? A-3：本制品經高溫高壓滅菌后溶液中已不含DEPC，使用時應避免RNase污染。 Q-4：使用10×Loading Buffer時需要注意什么? A-4：使用10×Loading Buffer時需要注意如下事項： 1. 10×Loading Buffer中含有SDS，-20℃保存后SDS會出現沉淀，首次使用時，請于50℃左右水浴中保溫溶解后使用。 2. 開封后室溫保存時，有時也會出現SDS沉淀，此時，請在水浴中保溫溶解后使用。 Q-5：使用6×Loading Buffer時需要注意什么? A-5：本制品不能作為蛋白質凝膠電泳（如：SDS-PAGE）中的Loading Buffer使用。 Q-6：使用核酸共沉劑時需要注意什么? A-6：使用核酸共沉劑時需要注意如下事項： 1. 本制品既可用于DNA樣品，也可用于RNA樣品。 2. DNA濃度極低（小于10 ng/ml）時，回收率會有所下降。 3. DNA溶液的體積小于400 μl時，DNAmate的添加量皆為4 μl；DNA溶液的體積大于400 μl 時，可按每100 μl的DNA溶液添加1 μl DNAmate的比例增加DNAmate的使用量。 4. 操作中不需要把DNA溶液低溫放置，混勻后即可直接離心回收。 5. 要嚴格按照操作方法的先后順序加樣，必須先加入DNAmate并充分混勻后再加乙醇。 Q-7：使用E.coli Competent Cells JM109/DH5α時需要注意什么? A-7：使用E.coli Competent Cells JM109/DH5α時需要注意如下事項： 1. 一定要用干冰運輸。 2. 不立即使用的感受態細胞請在-80℃下保存（融化后的感受態細胞不能再凍結保存）。 3. 轉化時請使用傳熱性能較好的試管。一般的1.5 ml微型離心管也可使用，但轉化效率會有所下降。 4. 對100 μl的感受態細胞，用于轉化的質粒DNA量請控制在10 ng以下，并保證DNA溶液 的體積在20 μl以下，否則會影響轉化效率。 5. 除SOC培養基以外，LB培養基或Фb-broth也可以使用，但有時效率稍低。 6. 包裝中附有0.01 ng/μl的pUC19 DNA，供作對照實驗使用。 Q-8：使用E.coli Competent Cells HB101時需要注意什么? A-8：使用E.coli Competent Cells HB101時需要注意如下事項： 1. 一定要用干冰運輸。 3 2. 不立即使用的感受態細胞請在-80℃下保存（融化后的感受態細胞不能再凍結保存）。 3. 轉化時請使用傳熱性能較好的試管。一般的1.5 ml微型離心管也可使用，但轉化效率會有所下降（此時請在使用方法5.的42℃下放置60秒）。 4. 對100 μl的感受態細胞，用于轉化的質粒DNA量請控制在10 ng以下，并保證DNA溶液的體積在20 μl以下。否則會影響轉化效率。 5. 除SOC培養基以外，LB培養基或Фb-broth也可以使用，但有時效率稍低。 6. 包裝中附有0.1 ng/μl的pBR 322 DNA，供作對照實驗使用。 Q-9：使用電轉化感受態細胞時需要注意什么? A-9：使用電轉化感受態細胞時需要注意如下事項： 1. 一定要用干冰運輸。 2. 不立即使用的Electro-Cells請在-80℃保存（融化后的Electro-Cells不能再凍結保存）。 3. 導入分子量較大的DNA（＞7 kbp）時，轉化效率稍低。 4. 使用SOC培養基的地方也可使用LB培養基，但轉化效率會有所下降。 5. 除SOC培養基以外，LB培養基或Фb-broth也可以使用，但有時效率稍低。 6. 50 μl的電轉化細胞中，轉化的質粒DNA量不能超過10 ng，否則效率會下降。