免疫酶標方法

一、直接法

1．標本固定。

2．PBS洗滌2×3分鐘。

3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。

4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。

5．滴加酶標記的抗體37℃1小時或4℃過夜。

6．PBS洗滌3×3分鐘。

7．DAB＋H2O2顯色5～10分鐘，鏡下控制染色結果。DAB＋H2O2應用提前15分鐘配制。

8．充分水洗后，復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

二、間接法

1．標本固定。

2．PBS洗滌2×3分鐘。

3．1% H2O2（或1% H2O2 甲醇）抑制內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。

4．正常血清（1:10）孵育，室溫20分鐘。

5．滴加第一抗體，37℃1小時或4℃過夜。

6．PBS洗滌3×3分鐘。

7．滴加酶標二抗，室溫1小時。

8．PBS洗滌3×3分鐘。

9．0.04%DAB＋0.03 %H2O2顯色5～10分鐘。

10． 充分水洗后，復染、脫水、透明、封片、鏡檢。

三、PAP法（過氧化物酶抗過氧化物酶抗體復合物法）

1．標定固定后，PBS洗滌。

2．1% H2O2（或1% H2O2甲醇）阻斷內源性過氧化物，室溫10～20分鐘。

3．PBS洗滌2×3分鐘。

4．正常血清（二抗的正常血清）孵育，室溫20分鐘。

5．滴加一抗，室溫1小時或4℃過夜。

6．PBS洗滌3×3分鐘。