小鼠 支原體 酶聯免疫 分析（ELISA）

試劑 盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關液體樣本中 支原體 的 含量。

實驗原理 ：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定 標本 中 小鼠 支原體 水平。用純化的 小鼠 支原體 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入 支原體 ，再與HRP 標記的 支原體 抗體結合，形成抗體- 抗原 - 酶標抗體復合物 ，經過徹底洗滌后 加 底物TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 支原體 呈正相關。用酶標儀在 450 nm波長下測定吸光度（ OD 值）， 通過標準曲線 計算樣品 中 小鼠 支原體 濃度。

試劑盒組成 ：

樣本處理及要求 ：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8 ℃的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可 將標本放于 -20 ℃保存，但 應 避免反復凍融 .

7. 不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10 孔，在第一、第二孔中分別加標準品 100 μ l，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50 μ l，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100 μ l分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50 μ l，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50 μ l棄掉，再各取 50 μ l分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul ，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50 μ l分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50 μ l，混勻后從第七、第八孔中分別取 50 μ l