相關專題 生物幫之抗體制備

【原理】

大分子顆粒性抗原 (如細菌、紅細胞等)與其相應的抗體相結合，在適量的電解質存在及一定的溫度下，經過一定的時間可出現肉眼可見的凝集團塊，是為凝集反應。

試管凝集實驗的應用，一般均以標準抗原 (已知抗原)測定免疫血清或患者血清中抗體的效價。

【材料】

1:10抗羊紅細胞免疫 血清(配制前需經56℃30分鐘滅活)

1%綿羊紅細胞生理鹽水懸液

生理鹽水

試管及1ml刻度吸管

試管架及吸液橡皮乳頭、紅蠟筆

恒溫箱

【方法】

1.取試管8支，排列于試管架上并做好標記。

2.每管各加入生理鹽水0.5ml。

3.吸取1:10抗綿羊紅細胞免疫 血清0.5ml加入第1管中并充分混勻。

4.自第1管中吸出0.5ml加入第2管中，經充分混勻后吸出0.5ml加入第3管中，如此依次稀釋至第7管，混勻后吸出0.5ml棄去。此時1~7管所含免疫 血清的稀釋度為1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640，1:1280第7管不加免疫血清做為對照。

5.1~8管每管各加1%綿羊紅細胞懸液各0.5ml。(注意：加入前必須將紅細胞懸液充分混勻)。

6.此時第1~7管的血清最終稀釋度為1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560。

7.搖勻后，靜置于37℃下，1小時后觀察結果并寫出實驗記錄。

【結果】

1.觀察前切勿搖動試管，以免凝集分散。

2.首先應觀察對照管，該管因無相對應的免疫血清故不應有凝集現象，血球應全部沉于試管底部呈規則園盤狀。如出現凝集現象則說明實驗操作有誤或血球本身有自凝現象，試驗結果不能成立。

3.再觀察1~6試驗管，并以++++、+++、++、+，分別表示凝集強度，不凝集者記以“―”。

++++：完全凝集，呈厚膜狀鋪于管底，邊緣呈鋸齒狀。

+++：血球呈薄層貼于管底，邊緣不齊。

++：中央呈較小園盤狀沉淀，邊緣凝集呈顆粒狀。

+：血球呈較大的園盤狀沉淀，邊緣有少量凝集顆粒。

―：無凝集，血球沉于管底園盤狀。

4.以血清最高稀釋度仍能出現“++”凝集現象者，作為該免疫血清的效價(滴度)。例如，在本次實驗中第5管(1:640)呈“++”凝集，第6管(1:1280)呈“+”凝集或“―”，對照管為“―”，則該血清的效價為1:640。

注：

1.免疫血清在實驗前須經56℃30分鐘滅活，是指對免疫血清中所含補體活性的滅活，如不滅活處理則直接影響凝集結果，例如在本次實驗中高濃度的免疫血清可使血球出現溶解現象。

2.本次實驗對凝集反應判讀結果的方法，僅屬對紅細胞凝集的判讀，而對其它顆粒性抗原(如細菌菌體抗原)在凝集反應中判讀結果的方法則在微生物學實習指導中另有說明。