使用雙向擴散法（Double diffusion）進行抗原分析

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【原理】

雙向擴散法是指可溶性抗原 與相應抗體在瓊脂介質中相互擴散而形成一定類型沉淀線的方法。沉淀線的特征與位置不僅取決于抗原抗體的特異性及相互間濃度比例，而且與其分子大小及擴散速度相關。當抗原抗體存在多種系統時，可呈現多條沉淀線以至交叉反應。

【材料】

生理鹽水1%瓊脂 管(每管約4ml)

載玻片

打孔器及打孔模板

微量加樣器及塑料吸頭

抗體及抗原1、2、3、4、5、6。

濕盒

【方法】

1.將已溶化的1%瓊脂鹽水管放56~60℃水浴箱中平衡溫度備用。

2.將載玻片置于水平桌面上，傾注已溶化瓊脂3.5~4ml，使成厚度約1.5mm瓊脂板。

3.凝固后，將打孔模板置于瓊脂板下，然后用打孔器打孔，根據不同需要可制成三角型、方陣型或梅花型。本次實驗采用三角型，即每一個三角型的三個孔為一組。(因本次實驗所制備的瓊脂板均以載玻片為底板故根據其大小只能采用三角型同時每一瓊脂板也只能制成兩組。否則，如采用方陣型或梅花型則因瓊脂板邊緣瓊脂厚度不夠而使周邊各孔所加抗原或抗體量不足或溢出，如制成三角型三組，因各孔相距過近相互滲透擴散而難于正確判定結果)。

4.用微量加樣器加抗體各10μl。各組所余兩孔各按抗原1、2為一組，3、4為二組，5、6為三組，分別各加入10μl。注意每加一樣品均需更換加樣器塑料吸頭，以防止交叉現象影響實驗結果。

5.作好記錄，放濕盒中，置37℃溫箱，24小時后觀察結果。

【結果】

說明：

(1)融合性沉淀弧，說明兩孔中抗原相同，為同一性反應。

(2)兩沉淀線獨自形成并形成交叉，說明兩孔中的抗原完全不同，為非同一性反應。

(3)融合性沉淀弧出現支線，或同時有另一條或兩條沉淀線，說明兩孔中抗原有相同部分又有不同部分，此為部分同一性反應。

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