用什么方法進行抗原修復

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(一)為什么要進行抗原 修復?

組織在制作過程中，由于化學試劑的作用封閉了抗原 ，又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發生扭曲，致使在免疫組化的染色過程中不能將其顯示出來，為了解決上述的問題，利用化學試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來或修正過來的過程稱為抗原修復。

在免疫組化 染色后的鏡下觀察中，有發現這樣的結果，陽性物反應不強，時隱時現，表達不均勻，有時可出現假陰性，這是因為：

1.組織在用甲醛固定的過程中所形成的醛鍵可封閉抗原 的決定族。甲醛與組織蛋白質類的反應是多樣而復雜的，因為它能和多種不同的功能基團結合，在多數情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個作用，因為它是一種聚合固定劑，因而能在相鄰的蛋白質鍵間形成橋鍵的作用。

2. 甲醛在保存進程中會形成羥甲基，也可封閉抗原 決定族。據French和Edsall的研究認為，最常遇到的甲醇反應，就是加到一個含反應性氫原子的化合物中，形成一個羥甲基化合物。

3.在組織固定過程中，甲醛與蛋白質發生交聯，形成醛交聯蛋白，這種化合物封閉了抗原，使之無法表達出來。

為了解決上述存在的問題，更好地暴露出抗原，將其很好地顯示出來，目前世界上公認的方法就是必須進行抗原修復。

(二) 用什么方法進行抗原修復?

至今為止，抗原修復有許多種方法，在這些方法中，有的是根據抗體的要求來進行，有的是根據抗原的表達程度來進行，我們則對每種病例每項檢測，都要求必須進行抗原修復，以達到抗原全面表達的最佳狀態。

(1)物理化學試劑抗原修復法。

1. 真空負壓抗原修復法：

① 切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇真空負壓處理5分鐘。

③自來水洗，蒸餾水洗。

④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0)，真空負壓干燥箱預先調至95℃，真空負壓處理10分鐘。

⑤待修復注降至室溫的一，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進行染色。

2.微波輻射抗原修復法：

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。

③自來水洗，蒸餾水洗。

④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0)，于微波爐內微波輻射10分鐘，如檢測Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。

⑤待修復液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學的染色方法進行染色。

3.高壓抗原修復法：

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

③自來水洗，蒸餾水洗。

④切片放入抗原修復液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續1-4分鐘。

⑤待修復液恢復至室溫后，PBS洗3次，隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。

4.隔水熱抗原修復法：

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

③自來水洗，蒸餾水洗。

④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應不斷用溫度計測其溫度，待抗原修復液的溫度達到有效溫度后(92℃↑)。即開始計時，持續40分鐘。

⑤待抗原修復液恢復至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進行染色。

5.電爐加熱抗原修復法：

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

③自來水洗，蒸餾水洗。

④ 將切片放入抗原修復液中于電爐上加熱，不時用溫度計測量溫度，當達92℃后，即可拔離電源，當溫度低于92℃時，再插上電源，如此反復持續至10分鐘左右。

⑤待抗原修復液降至室溫后，PBS洗3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進行染色。

對各種抗原修復方法的評價。

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