豬瘟單克隆抗體ELISA

相關專題 ? （一）材料及試劑 1．豬瘟單抗純化抗原 2．兔抗豬IgG酶標抗體 3．豬瘟陽性血清 4．豬瘟陰性血清 1～4均由指定的生物制品所購買。 5．ELISA反應板 6．包被液 碳酸鈉 1.50g 碳酸氫鈉 2.93g H2O加至 1 000ml pH值9.6 7．PBS 液 氯化鈉 8.90g 磷酸二氫鉀 0.20g 無水磷酸氫二鈉 2.13g 加雙餾水 1 000ml 8．PBS－吐溫洗滌液 PBS液 1 000ml 犢牛血清 5ml 混合即可 9．底物溶液 ⑴ 0.1Mol/L檸檬酸液 檸檬酸 21g 雙蒸餾水加至 1 000ml ⑵ 0.2Mol/L Na2HPO4液 Na2HPO4·12H2O 71.6g 雙蒸餾水 加至 1 000ml ⑶ pH5.0磷酸鹽－檸檬酸緩沖液 取⑴液 24.30ml ⑵液 25.70ml 混勻即可 ⑷鄰苯二胺液 取⑶液 50ml 雙餾水 50ml 磷苯二胺 20mg 30%H2O2 0.15ml 待鄰苯二胺溶化后再加H2O2，現用現配。 10．終止液 濃H2SO4(98%) 22.2ml H2O 177.80ml （二）操作方法 1．用包被液將豬瘟弱毒單抗純化酶聯抗原、豬瘟強毒單抗純化酶聯抗原各做100倍稀釋，每孔包被100μl，4℃濕盒過夜。 2．次日取出，甩去孔內液體，3×3′沖洗。 3．將待檢血清以PBS液做400倍稀釋，每孔加100μl同時將豬瘟陽性血清、豬瘟陰性血清各做100倍稀釋，于對照孔中加100μl。37℃溫育1.5h～2h。 4．重復第二步，取出，甩去孔內液體，3×3′洗滌。 5．將兔抗豬IgG酶標抗體以PBS液做100倍稀釋，每孔加100μl，37℃溫育1.5h～2h。 6．重復第4步。 7．每孔加底物溶液100μl，室溫下觀察顯色反應。當陰性對照孔稍顯色時，立即終止反應，并以陰性孔做空白對照。 8．每孔加終止液50μl立即于酶聯免疫 吸附檢測儀測定490nm波長的光密度。 （三）結果判定 在豬瘟弱毒酶聯板上，OD≥0.2，為豬瘟弱毒抗體陽性；OD＜0.2，為豬瘟弱毒抗體陰性。 在豬瘟強毒酶聯板上，OD≥0.5，為豬瘟強毒抗體陽性；OD＜0.2，為豬瘟強毒抗體陰性。