免疫學方法（ELISA法）檢測細胞凋亡

細胞凋亡事件發生時，會出現蛋白質和核酸分子結構的改變，形成新的表位。利用免疫學方法對這些表位進行鑒定，有助于判斷樣本中細胞凋亡事件的發生。

細胞凋亡的發生，是由于內源性核酸內切酶的激活，這種鈣和鎂依賴性核酸酶容易進入的核小體間區解開雙鏈DNA，產生單/低聚核小體片段，而核小體本身由于DNA與組蛋白H1、H2A、H2B、H3和H4形成緊密復合物而不被核酸內切酶裂解。采用雙抗體夾心酶免疫法，應用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體，與核小體片段形成夾心結構，可特異性檢測細胞溶解物中的單/低聚核小體，從而判斷細胞是否發生凋亡。

[材料與試劑]

(1)生物素標記的小鼠抗-組蛋白單克隆抗體；

(2)過氧化物酶(-POD)標記的小鼠抗DNA單克隆抗體；

(3)鏈霉親合素包被的微孔板；

(4)DNA-組蛋白復合物，作為陽性對照；

(5)ABTS底物；

(6)溶解緩沖液；

(7)溫育緩沖液；

(8)底物緩沖液；

(9)培養細胞或離體細胞的裂解物(細胞裂解步驟：收集細胞，離心后，用200μl溶細胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min)；

(10)培養細胞的上清液；

(11)血漿(血清)；

(12)分光光度計

[操作步驟]

(1)取樣品離心后(1000r/min，10min)，吸取20μl上清液，加入鏈霉親合素包被的培養板孔中；

(2)另加入80μl免疫反應試劑：含抗-DNA-POD、抗組蛋白-生物素及溫育緩沖液(按1:1:18混合)，室溫下孵育2h(置搖床上，250r/min)；

(3)棄上清，用300μl溫育緩沖液洗滌3次，小心移去洗滌液；

(4)加入100μl底物緩沖液，室溫下孵育至顏色變化至適合(置平板搖床上)； [結果判斷]

盡快作比色分析(10～20min內)，用底物緩沖液作空白對照，檢測波長405nm，參考波長492nm。 聚集值=樣品的mU(誘導凋亡處理的細胞)/對照的mU(未經誘導凋亡處理的細胞)*100 注：mU=吸收值(10-3 )=雙孔吸收值的平均OD值-底物OD值，若樣品的吸收值超過比色測定范圍，應適當稀釋后再檢測。