western blotting的一些細節-2
關鍵詞: western blotting 細節來源: 互聯網
上樣緩沖液的問題: ? 上樣緩沖液配多少濃度雙較合適,這個問題是很重要的。因為這里涉及到上樣量的問題。 如果上樣孔只能上樣30ul。而樣本中蛋白較少,要上樣25ul才有可能做出蛋白條帶。這個時候就要用到高倍上樣緩沖液。以下是6倍緩沖液的配方: ? 6*SDS凝膠上樣緩沖液: ? 300mM/L tris-HCl(pH6.8) 600mM/L DTT 12%SDS 0.6%溴酚藍 60% 甘油 ? 此外,提高上樣量還有一個辦法。就是在上樣緩沖液和樣品混合煮的時候開蓋,這樣可以使一部分水份蒸發,從而提高上樣量。
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