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葡萄糖來源AGEs ELISA檢測試劑盒

關鍵詞： 試劑盒 ELISA來源：互聯網

葡萄糖來源 AGEs ELISA 檢測試劑盒

（ Glucose-derived AGEs ELISA Kit ）

研究背景

越來越多的證據指出晚期糖基化終端產物（ AGEs ）修飾蛋白嚴重影響到老齡化人群的健康問題。 AGEs 是葡萄糖與自由的蛋白質氨基基團發生非酶促糖基化反應的終端不可逆代謝產物的總稱。

其在人體內的積累會引發組織或器官一系列的病理性變化，從而導致白內障、阿爾茨海默氏病、骨關節炎、心功能不全等疾病發生。糖尿病（高血糖）病發也與 AGE 在體內積累速度加快有關。

研究發現 AGEs 的生成來源主要是葡萄糖，還有二羰基化合物、短鏈還原糖和葡萄糖的其他代謝途徑。

目前確定結構屬于 AGE 的單體化合物有 CML 、 CEL 、 Pentosidine, Pyrraline, Imidazolone, Crosslin 等，針對這些化合物和 AGEs 、 AGE1 ～ 4 生產的抗體大量應用于生命科學和醫學領域，發表的相關論文一一都證實了 AGEs 是老化、與老化相關的慢性疾病發生的重要影響因素。

檢測原理

葡萄糖來源的 AGEs （ Glc-AGEs ） ELISA 試劑盒利用的是基于 “ 三明治 ” 原理的固相酶聯免疫吸附試驗（ ELISA ）。 96 孔板的表面有一層單克隆抗體涂層可直接識別樣品中 Glc-AGEs 的特異性抗原位點，然后使用 HRP 標記的 anti-AGE 抗體結合 Glc-AGEs 形成 “ 三明治 ” 復合物，最后酶顯色對樣品進行定性和定量研究。

檢測對象

人或其他動物的純化蛋白、血漿、血清和細胞裂解液。

試劑盒成分

(1) Antibody coated microtiter plate, 96 wells, 1 plate

(2) Glucose-derived AGEs standard , 250 uL×2

(3) Reference standard and sample diluent, 15 mL×1

(4) HRP- anti AGEs antibody concentrate(×100), 60 uL×1 (mouse monoclonal antibody)

(5) OPD (o-phenylendiamine) tablets, 2 tab.

(6) Substrate solution, 30 mL×1

(7) Stop solution, 15 mL×1

(8) Wash buffer concentrate (× 20) , 30 mL×1

(9) Dilution plate, 1 plate

實驗準備

工作液配制	清洗液	使用前確保 wash buffer 濃縮液內無結晶顆粒，往 30 ml 的濃縮液內加入 570 ml 去離子水即為工作液，此溶液可以保存在 2-8℃最多放 14 天。
抗體稀釋液	用 10 倍體積的清洗液稀釋 "Reference standard and sample diluent" 即可。
標準溶液	用等體積 "Reference standard and sample diluent" 稀釋 "Glucose-derived AGEs standard" （ 500ng/ml ），如下圖所示，依次配成 250, 125, 62.5, 31.25, 15.63, and 7.82 ng/ml 的溶液。
HRP 標記 -AGEs 抗體（ 100× ）	用 5 ml 的抗體稀釋溶液稀釋 50ul 的 HRP-anti AGEs antibody 濃縮液，稀釋后的抗體不能保存。
顯色液	在使用前加 1 片 OPD tablet 到 13 ml 底物溶液即可，此溶液需現配現用。
待測樣品的準備	用 "Reference standard and sample diluent" 稀釋樣品，若樣品濃度非常高，需用 PBS 進行預稀釋，最后再調整濃度至 100× 或更高。

實驗準備

1	96 孔板準備	加入 300 ul 的清洗液至每個孔內，溫育 30 min ；完全倒掉孔內溶液后，再加入 300ul 清洗液。再重復此步 2 次。
2	一抗反應	按 50 ul/ 孔的量加入標準溶液、稀釋樣品孵育 1 hour ，可以做兩個平行。孵育完成后吸去反應液，用 300 ul 清洗液清洗 3 次。
3	二抗反應	加 50 ul/ 孔的 100 倍稀釋的 HRP- anti AGEs antibody ，孵育 1 hour 。孵育完成后吸去反應液，用 300 ul 清洗液清洗 3 次。
4	顯色	加 100 ul/ 孔顯色液，孵育 10 min ；
5	終止反應	加 100ul/ 孔終止液終止酶顯色反應；
6	讀取吸光度	酶標儀在 490 nm 下讀取吸光值；
7	計算結果	使用標準曲線計算出 AGEs 的濃度，使用 4- Parameter Logistic Model 分析數據。

訂購信息：所有試劑-30 ℃保存，僅作科研研究。

產品名稱	貨號	特異性	規格	應用	價格（￥）
Glucose-derived AGEs ElISA kit	KG452	All animal species	96 tests	ELISA	8316.00

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