大鼠 C- 反應蛋白 (CRP) 酶聯免疫分析

試劑盒使用說明書

本試劑僅供研究使用 ? ????? 目的：本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關液體樣本中 C- 反應蛋白(CRP) 的含量。

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中 大鼠 C- 反應蛋白 (CRP) 水平。用純化的 大鼠 C- 反應蛋白 (CRP) 抗體 包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入 C- 反應蛋白 (CRP) ，再與 HRP 標記的 C- 反應蛋白 (CRP) 抗體結合，形成抗體 - 抗原 - 酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。 TMB 在 HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的 C- 反應蛋白 (CRP) 呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（ OD 值），通過標準曲線計算樣品中 大鼠 C- 反應蛋白 (CRP) 的含量。

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試劑盒組成 ：

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樣本處理及要求 ：

1. 血清：室溫血液自然凝固 10-20 分鐘，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。

2. 血漿：應根據標本的要求選擇 EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合 10-20 分鐘后，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 100 萬 /ml 左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的 PBS ， PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持 2-8℃ 的溫度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心 20 分鐘左右（ 2000-3000 轉 / 分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可 將標本放于 -20 ℃ 保存，但 應避免反復凍融 .

7. 不能檢測含NaN3的樣品 ，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（ HRP ）活性。

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操作步驟：

1.???????? 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔 10 孔，在第一、第二孔中分別加標準品 100μl ，然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液 50μl ，混勻；然后從第一孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液 50μl ，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉，再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液 50ul ，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取 50μl 分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液 50μl ，混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液 50μl ，混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為 50μl ，濃度分別為 1800μ g/L ， 1200μ g/L ， 600μ g/L ， 300μ g/L ， 150 μ g/L ）。

2.???????? 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、 待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40 μ l ，然后再加待測樣品 10 μ l （樣品最終稀釋度為 5 倍）。 加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.???????? 溫育：用封板膜封板后置 37 ℃ 溫育3 0 分鐘。

4.???????? 配液：將 30 （ 48T 的 20 倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 （ 48T 的