塵螨重組變應原的應用 ? ??? 1．特異性診斷技術的應用 ??? (1)重組變應原的診斷學：除了1類變應原外，其他絕大多數的塵螨重組變應原均表現出與IgE強反應性。經血清學試驗及皮內試驗檢測表明，重組1類變應原弱于2類，而重組5、7類變應原呈強反應性；實驗還證實了以3-4種重組抗原拼接的多價抗原效果優于單一者。皮試是有效、常見的檢測方法之一。重組抗原、多價重組抗原作為診斷試劑的優點：易于標準化，其比例可以精確和限定。 ??? (2)嵌合抗體：Chapman MD與Amsterdam大學聯合研制出用鼠抗Der p2單克隆抗體(Fab’)段與人源化重組IgE、IgGl和IgG4Fc段結合的嵌合抗體，后者既可以作為人類特異性變應原的探針，又能用于抗體反應的定性、定量測定。如抗Der p2嵌合IgE可用于IgE定量試驗，通過繪制與IgE反應及抗Derp21gE反應的標準曲線，可計算出IgE的含量(ELISA)。該項實驗適用于流行病學及免疫遺傳學等領域研究，以及IgE對特異性變應原的反應及診斷學，變應原特異性嵌合抗體檢測同型抗體的生物學功能也視為有價值的診斷工具。 (3)快速診斷對變應原的分析：分子技術的發展有利于改良對環境變應原檢測的手段，譬如室內變應原分析的“黃金標準”，即通過單克隆抗體結合ELISA測定空氣樣本以及保存的室內塵埃樣本，在繪制標準曲線、求得標準值以及經系統分析后所制訂的指標。快速測試系統適用于對醫院、診所、醫生辦公室、藥房以及居室等環境中變應原的檢測，這對減少病人與變應原的接觸有重要意義。在近幾年里，發展了快速半定量顯色測定法、斑點-ELISA等技術，前者以特異性抗體與硝酸纖維膜上的抗原起反應，后者能在3-4h檢測多種屋塵變應原。浸棒條檢測更具方便、簡捷的特征，10min就有檢測結果。此外，還有膠體金試驗等。這些技術的發展均有利于環境的檢測工作，而檢測工作又促使設計出更好的避免接觸變應原的裝置。 ? ??? 2．重組變應原與免疫治療 ??? (1)變應原重新設計與選擇：cDNA克隆重組變應原及氨基酸序列的研究對于發展新型變應原特異性治療有促進作用。顯然，多價重組變應原完全能代替傳統免疫治療所用的變應原提取物，通過對螨類、貓或花粉等變應原的修飾及臨床使用，已取得了令人滿意的效果。重組變應原優點在于能維持療效的一致性、減少不良反應，但即使非常精制的變應原(IgE反應的變應原)也存在同天然變應原(提取物)相似的不良反應。為了解決這個問題，必須解決新型免疫療法的設計，選擇那些能降低過敏反應調節、使變應原特異性T細胞失活，或者能改變T細胞類型如使Th2細胞轉變為Thl細胞免疫反應類型的變應原及相應的表位。目前的研究大多集中于Der p1、Der p2多肽T細胞的表位上。業已證明，某些Derpl主導表位有降低抗體應答的調節反應，還可避免以天然變應原誘導的哮喘發生(動物吸人試驗)。單一多肽是否能消除T細胞對天然變應原的應答還不很清楚，但有報道經定點誘變產生完整的重組變應原，可以減少與IgE的結合。分子修飾也可達到這個效果，例如Der p2第21、73位的半胱氨酸被其他氨基酸替代，能減少IgE介導皮內試驗反應的100倍，因為半胱氨酸可以維持T細胞的反應性。也可進行對重組變應原特異性位點的誘變，使其既保持T細胞的表位的完整性，又不能和IgE結合。 ??? 作為免疫制劑來說，經修飾、純化的重組表位肯定優于過去常用的多種變應原提取液及混合物。迄今為止，免疫治療中存在一個主要的問題仍然未被認識，即嬰幼兒早期治療是否在預防IgE應答的過敏性疾病更具效果。幼兒早期暴露于變應原的重要性以及出生4周的新生兒時期的Th2細胞效應還未發育完善，接觸天然變應原后是否可誘導出特異性的Thl細胞效應?研究證明，早期預防和干預對防止以IgE免疫效應過程是有效果的。眾所周知，過敏體質的雙親，其孩子過敏性疾病的發病率很高，具有明顯的遺傳傾向，像這類孩子可以作為早期干預的對象，結合免疫治療的同時，盡量避免接觸變應原。 ??? (2)佐劑與載體效應：以變應原蛋白交聯能誘導Thl細胞效應佐劑的構思巧妙，因為該交聯物能誘導B細胞只產生IgG而非IgE，結果導向無病理變化的免疫效應過程，該疫苗對于哮喘的預防十分有益。這類佐劑包括幾-12等。實驗證明，經卵白蛋白交聯IL-12免疫小鼠后，可以抑制IgE的產生；質粒或裸DNA疫苗也可誘導Thl細胞反應。令人驚奇的是p半乳糖苷酶結合人CMV載體免疫小鼠也可誘導產生IgG2。，而非IgE，甚至可抑制IgE的再次反應，故該系統克隆的重組蛋白(Der p5)可降低支氣管組胺的水平，抑制IgE效應以及氣道高反應性。裸DNA疫苗通過呈遞HLA-I類分子以及誘導產生IL-12，使之介導Thl細胞的效應途徑。 ??? 迄今，人們開始嘗試治療氣道高反應性的方法以及選擇的疫苗有：變應原特異性免疫治療、重組變應原免疫治療、DNA免疫治療、多肽免疫治療、多價特異性變應原的免疫治療、T細胞表位療法(T-cell epitope-based therapy)以及TCR多肽的干預等。