PCR在淋巴細胞抗原受體研究中的應用

PCR 在淋巴細胞抗原受體研究中的應用 ? ??? T細胞識別各種抗原，是依靠細胞表面的T細胞受體復合物(TCR)。TCR是由4條多肽鏈(α.β.γ.δ)組成，每條鏈由相應的基因編碼，其基因是由高變區(V)，多樣區(D)，連接區(J)和恒定區(C)組成。由于不同的V―D―J重排，使PCR產生多樣性和特異性。經PCR擴增可以檢測細胞單克隆基因重排，同樣，免疫球蛋白(Ig)重鏈基因重排是產生抗體多樣性和特異性的主要機理。不同的B細胞克隆可發生不同類型的重鏈基因重排，Ig重鏈可變區的多樣性源于其基因的可變區，多樣區和連接區的重排結果。可變區基因的可變性集中在三個區域，被4個序列保守框架區(FR1―4)所分割。由于這三個高可變區決定著抗體與抗原的結合部位，因此被稱為互補決定區(CDR)，其中第三個互補決定區(CDR3)含有幾乎所有V―D―J信息，可變性較高，可以代表細胞基因重排克隆標志。 ? ??? 采用PCR方法檢測基因重排的基本策略是針對已知的發生V―D―J重排的不同方式而設計出1對或多對相應的引物，進行一次或數次PCR擴增。將擴增產物直接測序或酶切及電泳分析，即可確定重排序列。 ? ??? 利用PCR技術檢測細胞基因重排，在腫瘤免疫研究中，已應用于淋巴細胞白血病的臨床檢測。對單克隆起源的急性淋巴細胞白血病，應用具有高度特異性和敏感性的PCR方法，很容易與正常的多克隆淋巴細胞的基因重排相鑒別，作為腫瘤克隆的標志，可進行微小殘留病灶的檢測。 ? ??? PCR技術已應用于檢測白血病時的有：①T細胞受體β鏈基因重排；②TCRγ鏈基因重排；③TCRδ鏈基因重排；④免疫球蛋白重鏈基因CDR3序列重排；⑤t(1;19)(q23;p13)染色體易位產生的E2A/PBX1融合mRNA；⑥t(10;14)(q24;q11)染色體易位；⑦檢測B細胞腫瘤時t(14;18)染色體易位等血液系統惡性腫瘤多種基因重排，基因突變以及人類T.B淋巴細胞白血病等。