PCR反應體系的耐熱DNA聚合酶
關鍵詞: PCR 反應體系 耐熱來源: 互聯網
PCR 反應體系的耐熱DNA聚合酶 ? ??? DNA的體外擴增是由許多不同來源的DNA聚合酶完成的。對PCR而言,熱穩定DNA聚合酶(如Tag、Vent和pfu)優于熱不穩定聚合酶(如T4、T7和Klenow),因為它們更易操作和實現自動化,其中以Taq DNA聚合酶的應用最為廣泛。Taq DNA聚合酶的分子量為94kD,這種酶不顯示任何3, →5, 核酸外切酶活性,它的最適反應溫度在75℃左右,對95℃的變溫具有良好的熱穩定性。 ? 在100μl PCR反應體系中,Taq DNA聚合酶的用量一般為1~2.5U之間。然而,由于DNA和引物的不同,以及其他條件的差別,聚合酶的使用量亦有所差異。PCR結束后一般可采用下述方法之一滅活Taq聚合酶:①100℃加熱10min;②加入10mmol/L EDTA;③酚:氯仿提取,乙醇沉淀DNA。
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