HLA/抗原肽四聚體制備技術

HLA/ 抗原肽四聚體制備技術 ? ??? MHC/抗原肽四聚體（tetramer）是借助親和素-生物素結合的原理，在體外將MHC分子（MHC-I類分子包括β2微球蛋白）及其所提呈的抗原肽組裝成的MHC-四聚復合物，作為TCR結合的配體，用于檢測和分離特異性T細胞。圖11-1是HLA-I/抗原肽四聚體結構示意圖。圖示由親和素與四個生物素化的HLA-I類分子抗原肽復合物單體結合后形成的四聚體結構，其中親和素分子還結合有熒光標記物。 ?? HLA-I/抗原肽四聚體示意圖 ? ??? MHC/抗原肽四聚體能夠模擬靶細胞表面MHC/抗原肽復合物，相當于TCR識別的配體，它能被某一特異性T細胞克隆識別，而且四聚體的MHC/抗原肽復合物與TCR的結合比單體的MHC/抗原肽復合物更為穩定。由于親和素結合有熒光標記物（通常為PE），從而借助流式細胞分選術可以將結合有MHC/抗原肽四聚體的T細胞克隆從無數種T 細胞克隆中檢測并分離出來。 ? MHC/抗原肽四聚體通過TCR與特異性T細胞結合 ? ??? HLA-I/抗原肽四聚體制備包括三個過程，HLA-I類分子單體的制備和純化，MHC-I類分子單體的生物素化和純化鑒定，四聚體的組裝及應用。 【HLA-I類分子單體的制備和純化】 HLA-I重鏈、輕鏈的制備 MHC-I 單體的折疊 折疊復合物的濃縮 透析或用脫鹽柱進行緩沖液交換 ↓ 【MHC-I 單體的生物素化和純化鑒定】 MHC-I 單體的生物素化 S300 Column 層析 Mono Q Column 層析 生物素化分析 ↓ 【四聚體的組裝及應用】 四聚體的制備 四聚體的應用