HE染色石蠟切片制作的基本過程

HE染色石蠟切片制作的基本過程：

1、取材與固定

從人或動物新鮮尸體上取下組織塊(一般厚度不超過0．5厘米)投入預先配好的固定液中(10％福爾馬林，Bouin氏固定液等)使組織、細胞的蛋白質變性凝固，以防止細胞死后的自溶或細菌的分解，從而保持細胞本來的形態結構。

2、脫水透明

一般用由低濃度到高濃度酒精作脫水劑，逐漸脫去組織塊中的水份。再將組織塊置于既溶于酒精，又溶于石蠟的透明劑二甲苯中透明，以二甲苯替換出組織塊的中酒精，才能浸蠟包埋。

3、浸蠟包埋

將已透明的組織塊置于已溶化的石蠟中，放入溶蠟箱保溫。待石蠟完全浸入組織塊后進行包埋：先制備好容器(如折疊一小紙盒)，倒入已溶化的石蠟，迅速夾取已浸透石蠟的組織塊放入其中。冷卻凝固成塊即成。包埋好的組織塊變硬，才能在切片機上切成很薄的切片。

4、切片與貼片

將包埋好的蠟塊固定于切片機上，切成薄片，一般為5—8微米厚。切下的薄片往往皺折，要放到加熱的水中燙平，再貼到載玻片上，放45℃恒溫箱中烘干。

5、脫蠟染色

常用HE染色，以增加組織細胞結構各部分的色彩差異，利于觀察。蘇木精(Hematoxylin，H)是一種堿性染料，可將細胞核和細胞內核糖體染成藍紫色，被堿性染料染色的結構具有嗜堿性。伊紅(Eosin，E)是一種酸性染料，能將細胞質染成紅色或淡紅色，被酸性染料染色的結構具有嗜酸性。染色前，須用二甲苯脫去切片中的石蠟，再經由高濃度到低濃度酒精，最后入蒸餾水，就可染色。

HE染色過程是：

①將已入蒸餾水后的切片放入蘇木精水溶液中染色數分鐘。

②酸水及氨水中分色，各數秒鐘。

③流水沖洗1小時后入蒸餾水片刻。

④入70％和90％酒精中脫水各10分鐘。

⑤入酒精伊紅染色液染色2～3分鐘。

6、脫水透明

染色后的切片經純酒精脫水，再經二甲苯使切片透明。

7、封固

將已透明的切片滴上加拿大樹膠，蓋上蓋玻片封固。待樹膠略干后，貼上標箋，切片標本就可使用。