五種不同的制備siRNA方法的比較
關鍵詞: 制備 sirna 方法來源: 互聯網
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比較項目 | 化學合成 | 體外轉錄 | RNase III降解dsRNA | siRNA 表達載體 | PCR 表達框 |
材料需求 | 21-mer RNA oligos(一對) | 29-mer DNA oligos(一對) | 轉錄模版 (200-1000bp,兩側帶T7 啟動子) | 55-60-mer DNA oligos(一對) | ~50-mer DNA oligos(一對) |
全部制備/合成時間所需時間 | 4天—2周 | 24 小時 + DNA oligo合成時間 | 1 天 + 轉錄模版制備時間 | 5天以上 + DNA oligo合成時間 | ~ 6 小時 + DNA oligo合成時間 |
個人所需操作時間 | 幾乎不需要* | 中等 | 中等 | 多 | 中等 |
是否需要驗證和尋找最有效siRNA | 需要 | 需要 | 不需要 | 需要 | 需要 |
能否標記siRNA (例如用于 熒光顯微鏡 分析siRNA進入細胞過程或者在細胞中的定位) | 能 | 能 | 能 | 不能 | 不能 |
轉染的相對難易程度 | 好 | 好 | 好 | 差 | 差 |
可篩選性 (例如 抗生素 篩選) | 不可以 | 不可以 | 不可以 | 可以 | 不可以 |
能否用于長效抑制 | 不可以 | 不可以 | 不可以 | 可以( 抗生素 篩選) | 不可以 |
能否大規模制備 | 可以 | 有限 | 有限 | 可以 | 有限 |
檢測總體轉染效率 | 不可以 | 不可以 | 不可以 | 可以 | 不可以 |
每個基因的相對費用(不包含人力) | 高 | 中等 | 低 | 中等 | 中等 |
*取決于合成后是否包含純化、去保護,以及廠家提供的是已經退火的即用型雙鏈還是凍干的單鏈 |
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